陈义波，龙玲，范幸，林蓓蓓(长沙市妇幼保健院妇科，长沙 410007)

    宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤，据最新全球癌症年报报道，我国2020年新发宫颈癌病例11万例，其中死亡病例数近6万例[1]，严重危害女性健康。Wilms肿瘤1相关蛋白(Wilms'tumor 1 associating protein，WTAP)作为一种致癌分子，在基因表达调控中发挥重要作用[2]。研究表明WTAP在胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤细胞中异常高表达，具有肿瘤特异性和促癌效应[3-4]，但其在宫颈癌中的作用尚未见明确报道。宫颈癌的发生发展过程极其复杂，细胞增殖失控在其中起重要作用[5]。丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT serine/threonine kinase，AKT)作为细胞存活和代谢过程的一种丝氨酸苏氨酸激酶，在细胞增殖调控中发挥重要作用[6]。AKT信号通路的激活能够调节大量下游靶分子，影响宫颈癌细胞增殖[7]。N6甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)修饰是最常见的RNA转录后修饰之一，影响RNA的剪接、翻译和稳定性[8]。m6A参与宫颈癌细胞增殖的调控，但作为m6A甲基转移酶关键组分的WTAP在宫颈癌细胞增殖调控中的作用暂无报道。本研究旨在探讨WTAP与宫颈癌预后的关系以及在宫颈癌HeLa细胞中的表达情况，并在HeLa细胞中敲低或过表达WTAP，观察其对细胞增殖的影响及探讨其可能的调控机制。

    1 材料

    人正常宫颈上皮细胞HUCEC、宫颈癌SiHa细胞和HeLa细胞(武汉普诺赛生命科技有限公司)，DMEM培养液、胎牛血清、胰蛋白酶、磷酸盐缓冲液(美国Gibco公司)，CCK8试剂盒和结晶紫染料(北京兰杰柯科技有限公司)。靶向WTAP的siRNA和对照siRNA(NC siRNA)(广州锐博生物公司)，对照质粒(empty vector)和WTAP过表达质粒(WTAPOE vector)(武汉淼灵生物科技有限公司)，转染试剂Lipofectamine 3000(美国Invitrogen公司)，抗WTAP、p-AKT、AKT和G蛋白信号调节物5(Regulator of G Protein Signaling 5，RGS5)抗体(美国Cell Signaling Technology公司)，m6A抗体(美国Abcam公司)，PrimeScript RT reagent Kit和TB Green Premix Ex Taq(日本Takara公司) ......