程永芳，段慧明(广西中医药大学科学实验中心，广西中医基础研究重点实验室，南宁 530200)

    肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是临床上较为常见的消化系统恶性肿瘤，发病率和病死率高。美国癌症协会发布的癌症统计分析报告显示，全球HCC发病率和病死率在恶性肿瘤中分别排第6位和第3位，主要分布在亚洲和非洲等[1-2]。由于肝癌早期不易被察觉，其转移快且隐蔽，大多数肝癌患者确诊时已到中晚期，并且我国肝癌患者大多在确诊时还伴随有严重的肝硬化，目前的多种治疗手段包括手术放化疗、靶向治疗、免疫治疗甚至联合治疗均未能改变其预后差、5年生存率低等特征。外泌体研究的兴起，深入研究外泌体在肝癌中的作用机制，将为肝癌的早期诊断、治疗和预后的评估开辟新的途径。

    外泌体是一种几乎所有类型细胞(包括肿瘤细胞)都会分泌的，直径为30～100 nm的小囊泡[3]。它们富含来自亲代细胞的选择性蛋白质和核酸，具有标志蛋白(CD81、CD9、CD63、TSG101、ALIX等)[4]，可传递关键成分，具有调节细胞间通信的潜力，并且是通过“运输”分子来调节细胞过程的关键信使。外泌体可以传递蛋白质、可溶性因子，最重要的是可以传递调节受体细胞蛋白表达的RNA和microRNAs(miRNAs)[5]。这对于机体的正常稳态和各种疾病包括肿瘤的发病机制都是非常重要的[6]。肿瘤来源的外泌体可能有助于肿瘤微环境的募集和重编程以形成促致瘤的土壤。肿瘤来源的外泌体可改变局部和全身微环境，通过将其内容物(如EGFRVIII、KRAS、lncRNAs或miRNAs等)转移到其他肿瘤细胞以诱导上皮间充质转变，迁移和侵袭或受体细胞耐药，从而促进肿瘤进展和转移并可通过TGF-β1或其他配体的分泌抑制肿瘤细胞凋亡[7-10]，本研究通过对HepG2肝癌细胞系外泌体的分离及分析，揭示外泌体在肝癌进展中的作用。

    1 材料

    1.1 细胞

    HepG2细胞株，购自中国科学院上海细胞库。

    1.2 试药

    DMEM高糖培养基(凯基生物)；胎牛血清(四季青)；兔CD9、TSG101、ALIX单克隆抗体及HRP-山羊抗兔二抗(Servicebio)；胰蛋白酶(Solarbio)；PBS缓冲液(凯基生物)；CCK-8试剂盒(Beyotime)；Caspase3/7细胞凋亡活性检测试剂盒“绿色荧光”(上海生工)；BCA蛋白定量试剂盒(南京建成) ......