韩承刚，李明显，姬丽芳，沙向阳，郑枫*(1. 中国药科大学药物分析教研室，南京 211198；2. 浙江省原料药安全研究中心(工艺技术创新平台)，杭州 10018；. 南京锐志生物医药有限公司，南京 211100)

    醋酸西曲瑞克(cetrorelix acetate)是一种由10个氨基酸组成的人工合成多肽(绝对构型见图1)，是第三代促性腺激素释放激素拮抗剂的代表，可以促排卵获取适当数量的高质量成熟卵母细胞[1]。

    图1 西曲瑞克的绝对构型(来源于SciFinder，CAS：120287-85-6)Fig 1 Absolute configuration of cetrorelix acetate(obtained from SciFinder，CAS：120287-85-6)

    多肽类药物的生物活性与其氨基酸的手性密切相关。在研究醋酸西曲瑞克一级结构时，需要将多肽在6 mol·L-1的盐酸和110℃条件下反应，该过程可能会引起手性氨基酸发生外消旋化[2-3]。2023年2月药品审评中心(CDE)发布的《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则》(试行)版中，对含有手性中心的氨基酸提出需要控制其异构体的要求，因此有必要对多肽合成中手性氨基酸的含量进行研究和控制。目前各国药典未见收载醋酸西曲瑞克的质量标准，关于其质量研究的文献报道也较少[4-6]。

    除含芳环结构的氨基酸外，绝大多数氨基酸不含发色基团，因此一般需经衍生化反应处理。柱前衍生化法是利用衍生试剂与氨基酸反应形成非对映体衍生产物的方法。目前已有文献报道了多种衍生化试剂用于氨基酸及胺类化合物的分析检测，包括Marfey试剂、2，4-二硝基氟苯、(FDNB)、荧光胺(FA)、邻苯二甲醛(OPA)、异硫氰酸苯酯(PITC)、丹磺酰氯等[2，7-9]。许多衍生试剂具有一定的局限性，例如不能分离手性氨基酸、衍生物性质不稳定、氨基酸衍生物的可检测性差等[10]。其中Marfey试剂具有强紫外吸收官能团，衍生产物专属性、稳定性强，衍生操作简便等优点[2]。因此本文开发了一种基于Marfey法，采用常规反相HPLC即可对醋酸西曲瑞克水解后10种氨基酸的构型及含量进行测定的方法，以期为醋酸西曲瑞克的结构确证提供依据。

    1 仪器与试药

    1.1 仪器 ......