罗珍华，宋成慧，李小川，张枢，张维维，李玉杰，段小群，徐笑天*(.桂林医学院 药学院，广西 桂林 5499；.苏州旭辉检测有限公司，江苏 苏州 56；.桂林医学院 生物医药产业学院，广西 桂林 5499)

    7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)是一种高效的选择性拓扑异构酶Ⅰ抑制剂[1]，由伊立替康在体内经过羧酸酯酶转化的代谢产物，其活性较伊立替康强100～1000倍，是结直肠癌的一线化疗药物[2]。然而，SN-38的疏水性和不稳定性限制了其临床应用[3]。研究表明SN-38在大鼠体内的生物利用度较低[4]，这与其在体内跟血浆蛋白的结合有关。

    药物的血浆蛋白结合率是药代动力学的重要参数，是药物临床评价的必要指标。常用的测定方法有平衡透析法、凝胶过滤法和离心超滤法等[5-6]。在前期试验过程中发现采用离心超滤法预处理，对SN-38吸附性较强，凝胶过滤法操作较为烦琐，且对于样本量较大时不适用，而平衡透析法的主要优点是可测定处于平衡状态下的游离型药物的浓度，可以最大限度反映药物在体内的情况，操作方便快捷，抗吸附能力较强，温度易于控制，设备成本低廉，实验原理简单。研究表明SN-38与血浆中的蛋白结合率在90%以上[7-8]，实际上能真正发挥药理作用的是不与血浆蛋白结合的游离药物。目前，国内多项研究采用LCMS/MS法测定SN-38的血药浓度[9-10]，这些研究多是测定血浆中SN-38的总浓度，并不能准确反映发挥药理作用部分的游离SN-38浓度。本实验以[2H5]SN-38为内标，优化了实验条件，采用平衡透析法分离出游离SN-38，建立平衡透析结合LC-MS/MS的检测方法，用蛋白沉淀法预处理透析液侧(F侧)、透析后血浆侧(T侧)和血浆样品检测其SN-38 的浓度；根据公式计算得到大鼠体内游离SN-38的浓度。该方法灵敏度高、简单快速，可为开展临床研究提供方法学的支持。

    1 材料

    1.1 仪器

    LC-20AD高效液相色谱仪(日本岛津)；API 4000、QTRAP 6500型质谱(AB SCIEX.PTE.LTD.，其中API 4000型质谱用于总SN-38浓度及T侧SN-38浓度的测定，QTRAP 6500型质谱用于F侧SN-38浓度测定)；96孔平衡透析装置(HTD 96 b-Complete Unit)、平衡透析膜(HTD 96 b-Adhesive Sealing Film)(HTDialysis)；高速冷冻离心机(5810R，Eppendorf)；精密电子天平(Secura 225D-1CN ......