向丹，李玉玫，王靖雯，徐伟，何洁月，杨云芝*(.南充市中医医院骨伤科，四川 南充 67000；2.筋骨病中医药防治南充市重点实验室，四川 南充 67000；.南充市食品药品检验所，四川 南充 67000；4.南充市中医医院中药制剂中心，四川 南充 67000)

    中药枳壳为芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)植物酸橙(CitrusaurantiumL.)及其栽培变种臭橙、香橙、枳橙的干燥未成熟果实，产地主要分布于江西、四川、湖南等地，按照产地的不同分别称为江枳壳、川枳壳和湘枳壳，其中江枳壳为道地药材，川枳壳为主流品种[1-2]。枳壳中化学成分类型主要包括黄酮类、挥发油类、生物碱类、苯丙素类等，其中黄酮类成分是枳壳的主要活性成分，也作为枳壳质量标准的重要标志物，其总含量可达15.44%[3-4]。目前已从中药枳壳中分离得到62个黄酮类成分，但多篇文献显示不同产地枳壳在黄酮类成分种类与含量上差异显著[5]。

    骨损伤或骨折是骨伤科最常见的疾病，损伤初期有明显的肿痛表现，中医认为此肿痛病机为气滞血瘀，常用枳壳行行气散瘀止痛之功效。本研究团队前期对我院筋骨病常用中药进行抗骨质疏松活性筛选时发现川枳壳乙醇提取物对成骨细胞具有增殖作用。中药枳壳药理作用众多，包括抗肿瘤、抗炎、抗抑郁、降血脂、胃肠功能调节、免疫调节等[6-7]，但未见关于抗骨质疏松方面的研究。故本研究通过大孔树脂、聚酰胺树脂富集川枳壳煎煮液中的黄酮类成分，并采用小孔树脂、硅胶柱色谱等分离手段对川枳壳黄酮类成分进行系统分离，共分离鉴定出12个黄酮类化合物，分别为柚皮苷(1)、新橙皮苷(2)、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷(3)、narirutin(4)、sarotanoside(5)、圣草酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)、柚皮素(7)、芫花素(8)、圣草酚(9)、angophorol(10)、南酸枣苷(11)、tetrahydroprotogenkwanone(12)(结构见图1)，通过体外细胞实验对12个黄酮类成分进行活性筛选，确定各化合物对成骨细胞增殖的影响。

    1 材料

    1.1 仪器

    Bruker Avance III-400 核磁共振仪、Bruker Daltonics MS质谱仪(德国布鲁克公司)；Multiskan FC酶标仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]；SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台(苏州净化设备有限公司)；二氧化碳培养箱(无锡沃信仪器有限)；CKX31倒置相差显微镜[奥林巴斯(中国)有限公司]；FA2004分析天平(上海力辰科技仪器有限公司)；TD5A医用离心机(常州市金坛高科仪器厂)；G-100S型超声波清洗器(深圳市哥能清洗设备有限公司)；ZF-2型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂)；RE-1102型旋转蒸发仪(上海嘉鹏科技有限公司)；SYG-4型数显恒温水浴锅(常州朗越仪器厂)；LCK2000煎药机(天津三延精密机械有限公司)；LDZX-30KBS 压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂) ......