朱国梁，罗顺，张晓莹(1.安徽中医药大学药学院，合肥 20012；2.南通市海门长三角药物高等研究院，江苏 南通 2261；.澳斯康生物(南通)股份有限公司，江苏 南通 226100)

    近年来治疗性抗体药物迅速发展，广泛应用于癌症、自身免疫性疾病、传染病等的治疗。大多数抗体药物是一类以γ型免疫球蛋白G(immunoglobulin G，IgG)形式存在的治疗性糖蛋白，通常在哺乳动物表达系统中表达。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)细胞具有生长稳定、适合大规模培养、对人类病毒敏感以及对人类细胞的类似翻译后修饰的特性，是生产重组抗体的常用宿主细胞[1-2]。

    提高CHO细胞培养性能，对降低抗体药物的生产成本至关重要，优化细胞株和工艺开发是提高抗体产量和质量的重点[3]，可采用基因工程[4-5]、优化培养基、改进补料策略[6]、使用添加剂等。抗体药物的翻译后修饰对其质量和功能具有重要影响，糖基化是一种常见且复杂的修饰方式，被广泛认为是抗体药物关键质量属性(critical quality attributes，CQA)之一，与药效学特性、免疫原性、稳定性等具有密切联系[7]。

    许多培养基添加剂可有效地提高CHO细胞培养中抗体的产量和质量，如短链脂肪酸丁酸钠(NaBu)可有效促进CHO细胞培养过程中抗体的生物合成[8-9]；金属阳离子对CHO细胞的生长、抗体的表达及糖基化具有重要的影响，如添加0.25～1.0 μmol·L-1氯化锰(MnCl2)可以有效降低Man5水平，并维持G0F、G1F和G2F等主要糖型的含量[10]；锌离子可增加mRNA稳定性并发挥抗凋亡和抗氧化作用，添加超过30 μmol·L-1的锌离子可以有效提高CHO细胞培养过程中的抗体表达[11-12]。本实验旨在探究NaBu、MnCl2和硫酸锌(ZnSO4)组合使用对CHO细胞的生长、抗体表达和糖基化的影响，以期提高抗体的产量和质量。

    1 材料

    1.1 细胞株

    本实验采用可稳定表达CD40/PD-L1的IgG1型双特异性抗体的CHO细胞株，细胞株来源于澳斯康生物(南通)股份有限公司。

    1.2 试药

    Dynamis培养基、抗结团剂(Anti-Clumping Agent，ACA)(美国Gibco公司)；Cell Boost 5、Cell Boost 7a、Cell Boost 7b补料(美国Hyclone公司)；L-谷氨酰胺(美国Sigma公司)；MnCl2(批号：C12791111 ......