王鸿杰，王锐，高雯(中国药科大学 中药学院，南京 211198)

    如何从中药复杂体系中分离并发现活性先导化合物一直是中药研究的一大挑战。目前，植物源中药小分子研究较为广泛，且具有较为成熟的活性成分分离和筛选方法，如亲和超滤法、生物色谱法、二维涡流色谱法、虚拟筛选法等[1]。然而除小分子外，植物源中药特别是种子类还含有各种活性肽/蛋白，如核桃仁中发现了含有血管紧张素转换酶抑制作用、酪氨酸酶抑制作用以及二肽基肽酶Ⅳ抑制作用的多种活性肽[2-4]，枸杞中含有抗肿瘤活性的枸杞环肽[5]，太子参中含有减轻慢性阻塞性肺疾病的作用的太子参环肽[6]等。同时，动物源中药如水蛭、鳖甲、地龙、鹿茸等含有的多肽和蛋白质被认为是其发挥疗效的物质基础[7]。如水蛭为破血消癥药，从中发现的水蛭素是迄今为止最强的天然凝血酶抑制剂[8]；鳖甲为补阴药，从中发现了具有保肝活性的鳖甲七肽[9]；阿胶为补血药，从中分离出具有刺激造血功能的十一肽[10]。菌类中药如冬虫夏草活性肽，具有提高免疫[11]、抗氧化、抗炎[12]等药理作用，灵芝活性肽具有抗氧化[13]、降压[14]、抗肿瘤[15]等药理作用。因此开发活性肽的发现及筛选方法也十分必要。

    活性肽是通过酶解、发酵等方式从前体蛋白质水解产生的生物功能超越其营养价值的氨基酸序列片段，其长度通常为2～20个氨基酸残基，分子量通常小于6 kDa。它们以非活性形式存在于前体蛋白中，水解释放后具有抗菌、抗氧化、降压和免疫调节等广泛生物学活性，并且具有毒性低、易代谢、无耐药性的特点[16]，用药前景良好。本文对中药活性肽纯化鉴定的流程以及活性肽筛选新方法进行综述(见图1)，以期为中药活性肽的发现提供理论参考。

    图1 活性肽发现流程图Fig 1 Flowchart of active peptide discovery

    1 基于活性导向的多肽分离鉴定法

    中药来源的活性肽包括天然提取活性肽和水解活性肽。天然提取活性肽即天然存在于中药中的多肽；水解活性肽即蛋白质被水解/酶解/发酵后暴露的具有活性的多肽片段[17]。对于水解活性肽，其制备往往需要将提取到的蛋白质水解成肽段后，再开展分离纯化。由于多肽分子量远小于蛋白质，其分离材料的选择与分离蛋白略有不同，如超滤膜孔径(通常<10 kDa)、凝胶(通常选择分子量分离范围1000～5000 Da)等 ......