王珊，曾娟，谢瑜，周日宝，刘湘丹，童巧珍，龙雨青，陈言，刘小丽*(.湖南中医药大学第二附属医院，长沙 4000；2.湖南中医药大学药学院，长沙 40208；3.湘产大宗道地药材种质资源及规范化种植重点研究室，长沙 40208；4.湖南省普通高等学校中药现代化研究重点实验室，长沙 40208；.焦作市产品质量检验检测中心，河南 焦作 44000)

    灰毡毛忍冬LoniceramacranthoidesHand.-Mazz.是中药材山银花的主要来源，具有清热解毒，疏散风热的功效[1]，是治疗内痈、外痈之要药。随着生物技术的快速发展，灰毡毛忍冬分子水平的相关研究也越来越多。其中对灰毡毛忍冬的基因研究多集中在参与其活性成分绿原酸生物合成[2-4]、黄酮类化合物合成[5-6]、植物激素乙烯合成[7-8]以及其花冠特殊表型等方面[9-11]，而关于其转录因子的相关研究报道则很少。

    bZIP(basic leucine zipper)转录因子是植物中非常重要且常见的一类生物蛋白，由高度保守的碱性区和相对保守的亮氨酸拉链区组成。bZIP 转录因子通过与靶基因的启动子区域结合，激活或抑制其转录，从而调控基因的表达，参与植物各种生物学过程，在植物的生长发育、次生代谢产物合成以及抵御逆境胁迫等方面都发挥着不可替代的作用[12-13]，如 bZIP 转录因子可以加速马铃薯生殖块茎的生长和衰老[14]。苹果MdbZIP44通过增加MdMYB1与下游靶基因启动子的结合，促进了脱落酸诱导的花青素生物合成[15]。陆地棉GhVIP1过表达后，提高种子发芽率和改善根系发育，使其耐旱性增强[16]。有研究对金银花五个花期的转录因子表达量进行差异分析，发现 49 个 bZIP 转录因子的表达量存在明显差异，提示其可能参与金银花的发育[17]。

    本研究利用课题组前期研究获得的灰毡毛忍冬转录组测序数据，筛选出在花不同发育阶段具有显著表达差异的bZIP25(log2Fold Change：2.12，P<0.05)，对其进行克隆及生信分析，并对其在不同器官、不同开花阶段的表达量进行研究分析，为后续深入探索灰毡毛忍冬bZIP25在花发育方面的功能研究奠定基础。

    1 材料

    1.1 药材

    灰毡毛忍冬花、叶及茎在湖南隆回采摘，经湖南中医药大学周日宝教授鉴定为灰毡毛忍冬的花、叶及茎，将采集的花样品按不同花期分成七个阶段(f1～f7)[5]。将样品于封口袋中密封，装入液氮罐中，带回实验室于-80℃冰箱保存。

    1.2 试药 ......