奥氮平对乳腺癌相关巨噬细胞增殖与分化功能的影响
共培养,1材料与方法,1细胞系,主要试剂及仪器,2细胞培养,3CCK-8法检测共培养条件下THP-1的细胞增殖活性,4实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测巨噬细胞表面分子与相关炎症因子的表达,5qRT-PCR
孟娟,李东辉,高元慧,刘梅,李建旺(海口市人民医院,.肿瘤内科;2.泌尿外科;.中心实验室,海口 570208)乳腺癌已成为全球女性发病率最高的肿瘤,严重威胁到女性的健康。乳腺癌的发生发展是多种因素共同作用产生的,除了生殖、遗传、饮食、生活方式及环境因素外,精神因素也是造成乳腺癌发病风险增加的重要因素[1]。奥氮平(OLZ)作为一种能拮抗5-羟色胺(5-HT)、多巴胺、胆碱能作用的精神类药物,不仅能稳定精神情绪,改善抑郁状态,提高睡眠质量,还具有良好的止吐作用[2-3]。作为止吐药物,奥氮平已成为美国国立综合癌症网络(NCCN)、欧洲肿瘤内科学会(ESMO)指南中预防高、中度致吐风险化疗药物的标准方案,在肿瘤对症治疗中广泛使用。然而奥氮平对于肿瘤的影响尚不明确,本研究通过奥氮平作用于体外乳腺癌细胞-巨噬细胞共培养体系,研究其对巨噬细胞增殖与分化的影响,探讨奥氮平在乳腺癌治疗中的作用。
1 材料与方法
1.1 细胞系、主要试剂及仪器
奥氮平(上海阿拉丁生化科技股份有限公司),佛波酯(PMA,Sigma,USA),DMEM基础培养基、胎牛血清(FBS)(Gibco,USA),Transwell培养板(Corning,USA),CCK-8(碧云天生物技术有限公司),动物组织/细胞总RNA提取试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司],miRNeasy Mini Handbook(德国Qiagen),HiScriptⅡQ Select RT SuperMix for qPCR(+gDNA Wiper)试剂盒、miRNA 1st Strand cDNA Synthesis试剂盒(by stem-loop)、ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix、miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix(诺唯赞),CO2恒温培养箱(上海一恒),酶标仪(Thermo,USA),荧光定量PCR仪(BioRad CFX96,USA)等。
1.2 细胞培养
THP-1细胞用完全培养基为含10% FBS的RPMI 1640培养,MDA-MB-231细胞用含10%FBS的DMEM培养。所有细胞置于37℃、5%CO2培养箱中培养,当MDA-MB-231细胞生长至融合时,先用pH 7.4 PBS缓冲液漂洗一次,然后用1 mL 0.25%胰酶消化细胞,待细胞开始变圆后,加入3 mL培养基终止胰酶的消化作用,吹吸细胞使其完全分散,再1∶3传代培养或调至所需细胞密度进行铺板 ......
您现在查看是摘要页,全文长 10507 字符。