赵晨阳，崔鹤蓉，岳德琼，张晗，李昶，李红艳*(.辽宁中医药大学，辽宁 大连 6600；.北京中医药大学，北京 0009)

    阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种进行性发展的神经退行性疾病，β-淀粉样蛋白(Aβ)过度累积和清除不足是AD发生发展的始动因素[1]。小胶质细胞是中枢神经系统的固有免疫细胞[2]，能够感知识别Aβ并将其吞噬在自身溶酶体中从而限制它们在大脑中扩散[3]，有效抑制AD的自然病程，该过程依赖于mTOR/HIF-1α途径[2]，并伴有PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活[4]。但长期暴露于Aβ环境中，小胶质细胞会出现能量代谢障碍并逐渐减少免疫应答而发展为慢性耐受[2]，导致Aβ大量沉积，造成大量神经元死亡和神经炎症反应，最终导致AD发生[5]。

    龙眼肉系无患子科植物龙眼(Dimocarpus longanLour.)的假种皮，龙眼肉多糖(longan aril polysaccharides，LAPs)是其主要有效成分之一。现代研究表明，LAPs能抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症介质产生和相关基因表达[6]，促进巨噬细胞的吞噬功能和炎症因子释放水平[7-9]。本研究基于文献报道和前期研究结果，体外建立Aβ诱导耐受的小胶质细胞(BV2)模型，探讨LAPs对Aβ耐受BV2细胞吞噬能力的影响，并结合课题组前期研究结果[10]及小胶质细胞免疫应答反应与PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路的相关性[2，4]，通过Western blot技术和荧光Aβ吞噬实验等分析LAPs改善BV2细胞吞噬功能的作用机制，为深入探究LAPs的抗AD作用奠定基础。

    1 材料

    1.1 细胞及培养

    小鼠小胶质细胞BV2(协和细胞库)，使用含10%胎牛血清与1%双抗的高糖DMEM培养基于37℃、5%CO2培养箱中培养。

    1.2 试药

    龙眼肉(货号：2206001，河北润滑药业)；Aβ1-42(批号：P210727-GB20601，上海捷妮泰生物科技)；Alexa Fluor 488荧光标记Aβ1-42(批号：2156636，Anaspec)；DMEM高糖培养基(批号：8121526)、胰蛋白酶(批号：2277231)(Gibco)；胎牛血清(批号：18070505，四季青)；双抗(批号：J200044，Hyclone)；抗GAPDH抗体(批号：3561122204)、抗AKT抗体(批号：55500009442)、抗P-AKT(S473)抗体(批号：5500011663)、抗HIF-1α抗体(批号：5500016723)、抗PI3K抗体(批号：3560538002)、HRP山羊抗兔IgG(H+L)(批号：9300014001)(ABclonal)；线粒体膜电位JC-1检测试剂盒(批号：20210712)、雷帕霉素(批号：427W021)、BAY87-2243(批号：709B021)(索莱宝) ......