抑制PI3K信号通路活化减少骨骼肌损伤后纤维化
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【中图分类号】R563.9【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2012)12-0035-02
【摘要】目的：探讨PI3K信号通路在骨骼肌损伤后纤维化过程中的作用。方法：对照研究不同干预方法对骨骼肌纤维化的影响，并检测信号通路蛋白在不同分组标本中的表达。结果：骨骼肌损伤后纤维化增加，PI3K信号通路活化，抑制PI3K通路活化有效减少纤维化。结论：PI3K信号通路参与调节骨骼肌钝挫伤后纤维化，抑制通路活化可以有效抑制纤维化。
【关键词】：纤维化；TGFβ1；PI3K
骨骼肌钝挫伤后常可导致纤维化，影响骨骼肌功能，并易再次损伤，而现有临床治疗手段效果不理想。研究证实，转化生长因子β1(Transforminggrowthfactorβ1，TGFβ1)在组织损伤后纤维化过程中起关键的枢纽作用[1]。损伤或疾病后组织中TGFβ1产生过多，与细胞膜结合，激活下游信号通路，最终促进细胞外基质增多，胶原纤维沉积，组织纤维化。三磷酸肌醇(Phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)信号通路是TGFβ1下游的一个重要信号通路，可被TGFβ1激活，导致级链反应，表现为下游的Akt磷酸化为p-Akt，最终加速mRNA的翻译过程，导致胶原纤维合成增多，组织纤维化[2]。本研究旨在观察抑制PI3k信号通路后对骨骼肌钝挫伤后纤维化的影响，为临床治疗提供新的思路和理论依据。
材料与方法
1动物和分组：成年雌性C57bl小鼠40只，质量20-25g，8-10周龄，饲养于复旦大学实验动物部，按国家标准正常饲养。实验动物随机分为三组：A组(正常组)，B组(损伤对照组)，C组(PBS组注射组)，D组(LY294002注射组)，每组10只。
2建立骨骼肌急性钝挫伤模型：参照Menetrey等的方法，采用重物高空垂直下落造成钝挫伤打击模型。B组、C组和D组小鼠用5%水合氯醛(0.7ml/100g)腹腔内注射麻醉，固定小鼠，曲踝关节90°，用7mm宽平头镊子固定小鼠腓肠肌中段，以50g钢球于30cm高度自由落体下砸双侧腓肠肌内侧，解剖证实成功率100%。A组小鼠正常饲养。
3干预方法及取材：B组无干预，C组和D组小鼠在骨骼肌损伤后1、2、3周分别于损伤局部皮下注射PBS和LY294002(1.5mg/kg，Chemicon公司)0.1ml，造模后4周取材。取全部小鼠双侧腓肠肌中段，左侧置入福尔马林中固定，右侧放入液氮中保存。
4骨骼肌纤维化指标检测：腓肠肌标本在中性福尔马林中固定3天后脱水，石蜡包埋，于中间部分纵行切片，厚15um，随后按Masson染色试剂盒(厦门迈威科技有限公司)说明书进行Masson染色。在Nikon80i显微镜下观察，20倍物镜下随机选取5个视野，用NIS-ElementsF3.0软件拍摄图片，随后用NIS-ElementsF2.30软件计算蓝色胶原纤维面积 ......
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