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编号:13767879
HPLC法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量
http://www.100md.com 2011年6月1日 《健康必读·中旬刊》 20116
     [摘要]目的:建立高效液相色谱法测定降脂灵胶囊中熊果酸的含量方法:色谱柱:YWGC18柱(250mm×4.6mm,5µm);流动相:甲醇-0.4%磷酸(86:14);流速:1.0ml/min;检测波长:205nm结果:熊果酸在0.470~3.760µg之间线性关系良好,相关系数r=0.99997。回收率为99.15%,RSD=0.72%结论:本方法简便,准确,重复性好,可用于降脂灵胶囊的质量控制

    [关键词]降脂灵胶囊;熊果酸;高效液相色谱法

    降脂灵胶囊是由山楂、泽泻、丹参等七味中药组成的制剂,具有利湿祛痰,活血逐瘀之功效,用于痰瘀互结型高脂血症,本文对其君药山楂中的熊果酸进行含量测定,作为检测和控制该制剂的含量指标,以利于该产品质量的

    有效控制。

    1仪器与试药
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    美国HP1100高效液相色谱仪(HP G1322A真空脱气泵、HP G1311A四元泵、HP G1313A ALS自动进样器,HP G1315 DAD二极管阵列检测器、HP Chemstation system化学工作站) SB3200超声波处理器(上海必能信仪器厂);电子天平(德国赛多利斯BP211D);熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)

    甲醇为色谱醇(天津化工二厂);水为双蒸水;其他化学试剂均为分析纯

    2方法与结果

    2.1色谱条件

    色谱柱YWG C18柱(250mm×4.6mm,5µm); 流动相:甲醇-0.4%磷酸(86:14); 流速:1.0ml/min; 检测波长为205nm; 理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于3000

, 百拇医药     2.2对照品溶液的制备

    精密称取在60℃减压干燥4h的熊果酸对照品适量,加流动相制成每1ml含150µg的溶液,即得。

    2.3供试品溶液的制备

    取本品内容物4g,精密称定,置索氏提取器中,加乙醚适量,回流提取至提取液基本无色,回收乙醚至干,残渣用石油醚(30~60℃)浸泡2次,每次15ml(约2min),倾去石油醚液,残渣加甲醇使溶解,转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,取滤液,即得。

    2.4线性关系考察

    精密吸取熊果酸对照品适量,用甲醇溶解制成浓度为0.188mg/ml的溶液,作为对照品溶液,分别精密吸取对照品溶液2.5µl,5µl,10µl,15µl,20µl依次测定,以熊果酸量(µg)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程Y=4003.65565X+1.53423,相关系数r=0.99997,结果表明熊果酸在0.470~3.760µg范围内线性关系良好。
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    2.5精密度试验

    精密吸取上述浓度为0.188mg/ml的对照品溶液10µl重复进样5次,RSD=1.17%,表明精密度良好。

    2.6稳定性试验

    精密吸取同一份供试品溶液在0、3、5、7、9h分别进样10µl,记录峰面积积分值,平均为847.215,RSD=1.48%,结果表明,试验方法稳定,供试品液至少在9h内测定较稳定。

    2.7重复性试验

    取同一批号的样品5份各约4g,精密称定,分别按供试品溶液制备方法进行提取,分别进样10µl,含量测定。测定几份样品熊果酸平均值为0.362mg/g, RSD=2.39%表明方法重复性良好。

    2.8回收率试验
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    分别取已知含量(0.362mg/g)的样品5份各2g,精密称定,分别精密添加一定量的对照品,按供试品溶液制备方法进行提取,含量测定,计算熊果酸回收率,平均回收率为99.15%,RSD=0.72%。

    2.9样品测定

    取三批样品,每批2份各4g,精密称定,按上述制备方法制备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和与供试品溶液各10µl按上述色谱条件测定,以外标法计算样品中熊果酸的含量,本品每粒中熊果酸含量应不低于0.15mg

    2.10空白试验

    取山楂阴性样品4g精密称定,照含测项下方法制备阴性样品溶液。精密吸取阴性样品溶液,样品溶液,对照品溶液及空白溶剂各10µl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,结果熊果酸相应的保留时间阴性无干扰。
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    3.1测定方法的确定

    据目前文献报道熊果酸含量测定方法有比色法,薄层扫描及高效液相等,但由于薄层扫描法受诸多不易控制因素影响,如薄层板的均匀性,层析时的蒸汽饱和度,温度,点样量的误差,显色时温度差异,相对湿度等直接导致定量分析结果重现性,精密度。稳定性欠佳,故采用HPLC法进行含测,该法准确,灵敏度高,重现性好,简便可行,更适用于该制剂的质量控制。

    3.2含测指标的选择

    君药山楂主要含有有机酸及黄酮类化合物两大类成分,其中金丝桃苷,熊果酸分别为黄酮类,有机酸类成分的主要成分,通过临床实验研究,二者均具有降低胆固醇和调节血脂作用,为全面监控本品中山楂的质量,实验对山楂中黄酮类成分金丝桃苷及有机酸成分熊果酸采用HPLC法进行含量测定研究,结果测定金丝桃苷时山楂阴性样品在与金丝桃苷相应位置有干扰,而熊果酸含量测定阴性无干扰,并通过方法学考察,本法线性关系良好,精密度,重现性。稳定性,回收率均较好,故采用熊果酸作为本制剂的含测指标。
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    3.3供试品溶液的制备

    本实验对供试品制备采用过多种方法,主要有以下几种:(1)先用石油醚(30~60℃)适量索氏提取1h,弃去提取液再用乙醚索氏提取至提取液近无色,倾出乙醚液蒸干,用甲醇定容至10ml量瓶中(2)先用乙醚适量索氏提取至提取液无色,挥干乙醚后用石油醚(30~60℃)浸泡2次,每次15ml(约2min)弃去石油醚液,残渣加甲醇定容至10ml量瓶中(3)样品用水溶解转移至分液漏斗中,先用石油醚(30~60℃)萃取2次,每次15ml,弃去石油醚层再用乙醚萃取4次(20、20、20、15)合并乙醚萃取液蒸干,用甲醇定容至10ml量瓶中,通过对三种方法的比较,以法(2)提取效率最高,故采用此种供试品溶液的制备方法。

    参考文献:

    [1]施慧君,黄有光.HPLC法测定知柏地黄冲剂中熊果酸含量.中药材[J]. 2004,27(2):136~137.

    [2]谭永红,姜云平,曾仁杰等,高效液相色谱法测定胃炎停胶囊中齐墩果酸,熊果酸的含量. 中国医院药学杂志[J]. 2004,24(2):71~72.

    [3]李标,张揩,曹文丁等,高效液相色谱法测定山楂叶中金丝桃苷的含量. 中国药业[J]. 2003,12(12):37~38., http://www.100md.com(杨 蕾)