人神经营养素-3基因修饰的神经干细胞(2)
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参见附件。
2结果
2.1 神经干细胞培养及鉴定
原代培养5～7天， 即形成悬浮生长的神经球(图1)，免疫荧光Nestin染色阳性，在荧光显微镜下观察呈绿色(图2)。
图1倒置显微镜下观察呈悬浮生长的神经干细胞球
图2荧光显微镜下观察呈绿色的
Nestin 染色阳性的神经干细胞球
2.2 免疫荧光染色
图3免疫荧光染色
各组大鼠缺血侧海马DG区新增殖的BrdU+细胞(红色)、DCX+细胞(绿色)及非特异性细胞核DAPI染色(蓝色)。其中 A-E 为NSCs-hNT3治疗组，A1-E1为 NSCs治疗组；A2-E2为生理盐水对照组。D、D1及D2分别为对应组别的融合图像，BrdU+/DCX+的细胞显示为黄色。E、E1及E2分别为对应组别融合图像的局部放大，箭头所示为BrdU+/DCX+细胞，即海马DG区新增殖并已向神经元方向分化的内源性细胞。Bars=100µm
图4各组缺血侧海马DG区增殖细胞数比较。
*表示组间比较，统计学差异显著(P<0.05)
虽然海马组织未直接受到缺血性损伤，但是缺血发生后，缺血性损伤同侧海马区也会出现新生细胞增多，表现为BrdU+(红色)，主要位于齿状回附近(图3)。细胞移植2周后，Kruskal-Walis检验示3组间BrdU+细胞数有显著性差异 (X2=13.36， P=0.001)，NSCs-hNT3治疗组和NSCs治疗组海马齿状回SGZ和SCZ BrdU+细胞数(63.8±8.1 cells/800µm，52.5±6.7 cells/800µm)显著高于生理盐水对照组(13.3±2.5 cells/800µm)(P=0.004， P=0.004 respectively)，且NSCs-hNT3治疗组BrdU+性细胞数也显著高于和NSCs治疗组 (P=0 ......
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