Cyclin D1和Survivin在乳腺癌及乳腺纤维腺瘤组织中的表达及临床意义
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[摘要]目的检测细胞周期蛋白Cyclin Dl和凋亡抑制因子Survivin在乳腺癌中的表达，探讨其与乳腺癌的关系。方法采用免疫组化法检测40例乳腺癌组织、40例乳腺纤维腺瘤组织以及20例正常乳腺组织中Cyclin D1和Survivin的表达，并分析其临床病理意义。结果Cyclin D1和Survivin在乳腺癌组织中的阳性表达率分别为72.5%(29/40)和65.0%(26/40)，在乳腺纤维腺瘤中的阳性表达率分别为27.5%(11/40)和25.0%(10/40)，而在正常乳腺组织中无表达，在乳腺癌中的表达明显高于乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织(P<0.01)；Cyelin Dl和Survivin的阳性表迭与乳腺癌的病期、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05)，而与肿瘤大小无关(P>O.05)；Cyolin Dl的阳性表达和Survivin的阳性表达呈正相关。结论Cyelin D1和Survivin在乳腺良、恶性肿瘤及乳腺正常组织中的表达有明显的差异：其表达与乳腺癌的病期及淋巴结转移有关；Cyelin Dl和Survivin的表达有相关性。
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[关键词]Cyclin Dl；Survivin；乳腺癌；乳腺纤维腺瘤
[中图分类号] R655.8 [文献标识码]A [文章编号] 1672-4208(2010)05-0001-03
从病因学上探讨乳腺癌的发生、发展机制，找出更为有效的治疗方法是国内外科学家研究的重点课题之一。本研究通过检测乳腺癌组织中的Cyclin D1和Survivin的表达，分析这些基因蛋白之间的相互关系及与临床病理的关系，探讨Cyclin D1和Survivin在乳腺癌发生、发展中的作用，为乳腺癌的诊断和基因靶向治疗提供依据。
1、材料与方法
1.1 材料 收集青海大学附属医院2009年2月-2009年9月有完整病历资料的经手术切除的乳腺癌标本40例、乳腺纤维腺瘤标本40例及癌旁正常乳腺组织标本20例。乳腺癌依照TNM分期标准：Ⅰ级13例，Ⅱ级13例，Ⅲ级9例，Ⅳ级5例，患者均为女性，年龄最小25岁，最大77岁，中位年龄46.3岁。其中有淋巴结转移的26例.转移率为62.5%，所有乳腺癌患者术前均未接受化疗及内分泌治疗。
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1.2 主要试剂 一抗为兔抗人Cyclin-D1单克隆抗体，兔抗人Survivin多克隆抗体(均为即用型)，DAB显色试剂盒，均购于福州迈新生物技术有限公司。
1.3 方法将石蜡包埋的标本制成3 um的切片.采用免疫组化二步法检测上述抗体对应的抗原.所有试验操作均按照说明书操作规范执行，染色方法和步骤按EliVision二步法试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，以已知的阳性反应组织切片作为阳性对照组。
1.4 染色特征及结果判定Cyc|in Dl阳性着色主要为细胞核呈棕黄或棕褐色(见图1)；Survivin阳性着色主要为细胞浆呈棕黄或棕褐色(见图2)；每张切片随机选取有肿瘤组织的不同高倍视野(×400).计数1000个肿瘤细胞，根据阳性细胞数所占的百分比率判断阳性分级：5%-24%为+；25%-49%为++；≥50%为+++。
1.5 统计学方法采用SPSS 13.0软件进行数据分析，进行多个率的X2检验和Spearman等级相关分析，以p<0.05为差异有统计学意义。
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2、结 果
2.1
Cyclin Dl的表达40例乳腺癌患者中Cvclin D1阳性表达29例(72.5%)；40例乳腺纤维腺瘤中Cyelin Dl阳性表达11例(27.5%)；20例正常乳腺组织中Cvclin DI无表达；Cyclin DI在乳腺癌中的表达明显高于乳腺纤维腺瘤和乳腺正常组织，差异有统计学意义(P<0.01)。
2.2
Survivin的表达40例乳腺癌患者中Survivin阳性表达26例(65.0%)；40例乳腺纤维腺瘤中Survivin阳性表达10例(25.O%)；20例正常乳腺组织中Survivin无表达；Sur-vivin在乳腺癌中的表达明显高于乳腺纤维腺瘤和乳腺正常组织，差异有统计学意义(P<0.01)。
2.3
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Cyclin Dl和Survivin在乳腺癌中的表达与l临床病理的关系40例乳腺癌组织中.Cyclin D1和Survivin的表达与TNM分期及淋巴结转移成正相关(P<0.05)。见表1。
2.4 Cyclin D1和Survivin在乳腺癌中表达的相关性40例乳腺癌患者中Cyclin D1阳性表达29例，阴性表达11例；Survivin阳性表达26例，阴性表达14例，而者共同阳性表达24例.Cyclin Dl和Survivin的阳性表达呈正相关(r＝0.47.P＝0.001)。
3、讨 论
细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)是近年来发现的原癌基因，其调节作用与抑癌基因pRb磷酸化密切相关，通过与CDK4结合形成Cyclin DI/CDK4复合物促进pRb磷酸化，从而凋节细胞增生进程，在细胞周期进展中起正调节作用。正常情况下。CyclinDl蛋白只在GI期一过性表达，若表达失控驱动细胞越过临界限制点从G1期进入S期，导致细胞周期异常则会产生肿瘤。研究报道.Cyclin D1在许多肿瘤组织中都有不同强度的阳性表达.如食管癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等均发现有Cyclin D1基因扩增和过表达。在有些恶性肿瘤中随着肿瘤的浸润.Cyc-lin D1表达渐增.并且在转移癌中的扩增明显高于原发癌。Carreras等研究表明，Cyclin D1的异常表达与宫颈七皮病变的严重程度相关，其阳性表达率随着细胞分化程度的降低而升高。Federica B等研究显示Cyclin D1的表达与卵巢癌预后成正相关。Arber等用含完整反义Cyclin DlcDNA的逆转录病毒质粒pMV7 DIAS转染Cyclin D1高表达的人类结肠癌细胞系SW480E8后，导致转染细胞Cvclin D1蛋白表达下降，并丧失裸鼠的致瘤性。综上所述，Cvclin D1与恶性肿瘤的发生和发展密切相关，可作为一项检测指标，用于恶性肿瘤的联合诊断、病情评估、疗效观察和预后预测。
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Survivin基因是近年来发现的凋亡蛋白抑制因子(inhi-tltor of apoptesis protein)家族中的一个新成员，因其抑制凋亡有利于肿瘤细胞存活而又名为存活素，除具有很强的抗凋亡作用外，它还与细胞的增殖、分裂和细胞周期调控有关。Survivin主要表达于胚胎和发育中的胎儿组织，在成人终末分化组织(除了睾丸、胎盘和胸腺)通常不表达.而在多种恶性肿瘤组织(如：肺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、胰腺导管细胞癌、结肠癌等)中异常高表达。它是至今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一，通过直接或间接抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶有效地对抗细胞的凋亡过程。在肿瘤的发生、发展中Survivin过表达，使s期核转运加速，帮助细胞逃避细胞周期检测点，加快向S期转换。抑制G1期阻滞，通过调控有丝分裂促进转化细胞异常增殖。此外，Survivin还参与血管的生成。正常血管内皮细胞不表达Survivin.研究证明肿瘤血管内皮细胞过度表达Survivin，使得肿瘤血管内皮细胞凋亡减少，有利于肿瘤生长。由此可见，Survivin参与了肿瘤发生发展的诸多环节，与肿瘤的发生和进展密切相关，其表达往往与肿瘤的恶性程度、预后不良呈正相关关系，是一个有潜在价值的肿瘤标志物。
Suzuki等在研究SUrVIVIn对细胞周期的影响时发现，在过表达Survivin的细胞系中c1期细胞数减少而s期细胞数增多，G2/M期细胞数无明显变化，进一步研究发现Sur-vivin可阻止p21对cyclinDl/cdk4复合物的抑制，通过使cdk4抑制蛋白P21自Cyclin D1-cdk4复合物解离使CyclinD1-cdk4活化，催化Rb蛋白磷酸化。从而加速G1/S期转换，间接促进细胞增殖。由此我们推测：二者在恶性肿瘤的发生发展中通过纷繁交错的信号途径对细胞周期的调节发挥作用。, http://www.100md.com(雷喜锋 窦拉加)