八月札水提物对H22荷瘤鼠血清总抗氧化能力\超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响
[摘要]目的：研究八月札水提取物对H22肝癌荷瘤小鼠血清中T-AOC(血清总抗氧化能力)、SOD(超氧化物歧化酶)活性和MDA(丙二醛)含量的影响。方法将4只小鼠接种鼠肝癌H22细胞株制成腹水型瘤源鼠，7d后处死瘤源鼠稀释其腹水并接种于实验小鼠制成荷瘤鼠，将H22荷瘤鼠随机分成6组，每组12只，雌雄各半；接种次日，随即各实验组灌胃中药、凉开水连续给药12d，隔日称体重1次，停药次日处死动物并进行指标检测。结果药物大剂量+环磷酰胺组肿瘤抑制率最高为65.05%，该组SOD含量(237.12±22.18)μ/ml，T-AOC含量(8.20±1.76)μ/ml，MDA含量(4.72±1.99)μ/ml。结论：八月札水提物能够明显抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，具体机制可能与有效改善小鼠体内氧自由基代谢有关。
[关键词]八月札；超氧化物歧化酶；丙二醛；血清总抗氧化能力；H22荷瘤鼠
, 百拇医药 [中图分类号]R965
[文献标识码]A
[文章编号]1672-4208(2010)11-0004-02
八月札是一种野生佳果，无不良反应，为木通科木通属植物木通、三叶木通、白木通的成熟果实的总称，分布在我国南部、长江流域和西北地区。在“抗癌中药大辞典”中记录其对消化系统肿瘤和乳腺癌有较好的治疗作用。但是在国内对其研究还仅限于化学成分的分析及鉴定，抗肿瘤作用的研究报道较少。笔者于2009年7月-2010年3月进行了八月札水提物对H22肝癌荷瘤小鼠保护作用的实验研究，通过计算肿瘤抑制率和检测血清中T-AOC、SOD的活性和NDA含量，评价八月札水提物对荷瘤小鼠的治疗作用及其抗氧化能力。
1、材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
1.1.1 实验动物 健康昆明种小鼠72只，5周，18-22 g，雌雄各半，由佳木斯大学实验动物中心提供，将以上小鼠分笼喂养，正常饮食，定期紫外线消毒，清洁卫生。
1.1.2 实验试剂 八月札购自佳木斯大学中医药研究所，SOD、T-AOC和MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.1.3 实验仪器 旋转蒸发仪、超声仪、光学显微镜(欧林巴斯公司生产)、电子天平(美国Satems公司生产)、722光栅分光光度仪。
1.2 方法
1.2.1 实验设计及分组 将小鼠随机分成6组，每组12只，雌雄各半；分为阴性对照组，阳性对照组(环磷酰胺)，八月札水提物大剂量组、小剂量组，八月札水提物大剂量(小剂量)加环磷酰胺组。
1.2.2 肿瘤接种 将4只小鼠腹腔注射鼠肝癌H22细胞株，每只鼠0.2ml，制造腹水型瘤源鼠，接种7 d后的瘤源性小鼠，固定在手术板上，酒精消毒腹部局部皮肤，用无菌注射器抽取乳白色腹水，置于无菌器皿内，从中取0.1 ml腹水，加0.9 ml生理盐水，摇匀，用滴管从中取1滴置于小瓶内，再用滴管滴加9滴台盼蓝液，在显微镜下用细胞计数板计数后，用生理盐水稀释腹水，调整细胞密度为l×107/ml，按0.2 ml/只接种于经酒精消毒后的小鼠的左前腋下，整个实验操作在1 h内完成，术后观察动物行为有无异常。所有小鼠经接种肿瘤细胞后，均常规饮食。
, http://www.100md.com
1.2.3 八月札水提取物的制备 中药适当粉碎后加蒸馏水(1:10)，浸泡3 h，煮沸提取60 min，收集药液，药渣再用水煮30 min，合并2次药液，经50℃减压浓缩，真空干燥箱放置干燥，得八月札水粗提物固体干粉，临用前蒸馏水稀释为含生药浓度。
1.2.4 接种实体瘤动物的处理 接种次日，随即各实验组灌胃中药、凉开水连续给药12 d，隔日称体重1次，停药次日处死动物。
1.2.5 数据的统计学处理 实验结果用(x±s)表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验。
1.2.6 小鼠血清中SOD、MDA和T-AOC水平的测定采用比色法进行测定。
1.2.7 肿瘤抑制率的计算 肿瘤抑制率＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。
, 百拇医药 2、结 果
2.1 肿瘤抑制率的计算 通过计算肿瘤抑制率发现，各用药组对荷瘤鼠体内肿瘤生长均有不同程度的抑制作用，其中八月札和环磷酰胺联合用药组肿瘤抑制率明显高于其他用药组；提示八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，并可能和环磷酰胺之间存在协同作用。详见表1。
2.2 八月札水提物对小鼠血清中SOD、MDA和T-AOC水平的测定通过试验获得各实验组SOD、T-AOC活性和MDA含量的检测结果表明，阳性对照组、药物组、联合用药组同阴性对照组比较均能够明显提高小鼠血清中SOD和T-AOC活性，提高清除自由基、抗氧化应激和维持体内环境活性氧的动态平衡能力；并显著降低MDA水平，减轻脂质过氧化损伤。详见表2。
3、讨 论
SOD具有极强的清除自由基、抗氧化应激功能，MDA的含量可间接估计脂质过氧化的程度。机体防御体系中体内T-AOC的作用主要是维持内环境活性氧的动态平衡，清除过高的活性氧，使机体处于氧化还原相对稳定的状态，代表体内酶类和非酶类抗氧化物的总体水平。
在本实验中，通过计算肿瘤抑制率发现八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，其中八月札和环磷酰胺联合用药组肿瘤抑制率明显高于其他用药组；提示八月札水提物和环磷酰胺之间可能存在协同作用，有待进一步深入研究；各实验组小鼠血清中T-AOC、SOD活性显著高于阴性对照组，MDA含量显著低于阴性对照组，表明八月札水提物能够提高小鼠清除自由基、抗氧化应激和维持体内环境活性氧的动态平衡能力，同时减轻脂质过氧化损伤。
八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，明显改善荷瘤鼠生存质量，具体机制可能与其有效改善荷瘤鼠体内氧自由基代谢有关。, 百拇医药(白 雪 关宝生 魏晓东 刘丽娜 卞德强 李学臣 王明富 张 涛)
[关键词]八月札；超氧化物歧化酶；丙二醛；血清总抗氧化能力；H22荷瘤鼠
, 百拇医药 [中图分类号]R965
[文献标识码]A
[文章编号]1672-4208(2010)11-0004-02
八月札是一种野生佳果，无不良反应，为木通科木通属植物木通、三叶木通、白木通的成熟果实的总称，分布在我国南部、长江流域和西北地区。在“抗癌中药大辞典”中记录其对消化系统肿瘤和乳腺癌有较好的治疗作用。但是在国内对其研究还仅限于化学成分的分析及鉴定，抗肿瘤作用的研究报道较少。笔者于2009年7月-2010年3月进行了八月札水提物对H22肝癌荷瘤小鼠保护作用的实验研究，通过计算肿瘤抑制率和检测血清中T-AOC、SOD的活性和NDA含量，评价八月札水提物对荷瘤小鼠的治疗作用及其抗氧化能力。
1、材料与方法
1.1 材料
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1.1.1 实验动物 健康昆明种小鼠72只，5周，18-22 g，雌雄各半，由佳木斯大学实验动物中心提供，将以上小鼠分笼喂养，正常饮食，定期紫外线消毒，清洁卫生。
1.1.2 实验试剂 八月札购自佳木斯大学中医药研究所，SOD、T-AOC和MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.1.3 实验仪器 旋转蒸发仪、超声仪、光学显微镜(欧林巴斯公司生产)、电子天平(美国Satems公司生产)、722光栅分光光度仪。
1.2 方法
1.2.1 实验设计及分组 将小鼠随机分成6组，每组12只，雌雄各半；分为阴性对照组，阳性对照组(环磷酰胺)，八月札水提物大剂量组、小剂量组，八月札水提物大剂量(小剂量)加环磷酰胺组。
1.2.2 肿瘤接种 将4只小鼠腹腔注射鼠肝癌H22细胞株，每只鼠0.2ml，制造腹水型瘤源鼠，接种7 d后的瘤源性小鼠，固定在手术板上，酒精消毒腹部局部皮肤，用无菌注射器抽取乳白色腹水，置于无菌器皿内，从中取0.1 ml腹水，加0.9 ml生理盐水，摇匀，用滴管从中取1滴置于小瓶内，再用滴管滴加9滴台盼蓝液，在显微镜下用细胞计数板计数后，用生理盐水稀释腹水，调整细胞密度为l×107/ml，按0.2 ml/只接种于经酒精消毒后的小鼠的左前腋下，整个实验操作在1 h内完成，术后观察动物行为有无异常。所有小鼠经接种肿瘤细胞后，均常规饮食。
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1.2.3 八月札水提取物的制备 中药适当粉碎后加蒸馏水(1:10)，浸泡3 h，煮沸提取60 min，收集药液，药渣再用水煮30 min，合并2次药液，经50℃减压浓缩，真空干燥箱放置干燥，得八月札水粗提物固体干粉，临用前蒸馏水稀释为含生药浓度。
1.2.4 接种实体瘤动物的处理 接种次日，随即各实验组灌胃中药、凉开水连续给药12 d，隔日称体重1次，停药次日处死动物。
1.2.5 数据的统计学处理 实验结果用(x±s)表示，采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验。
1.2.6 小鼠血清中SOD、MDA和T-AOC水平的测定采用比色法进行测定。
1.2.7 肿瘤抑制率的计算 肿瘤抑制率＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100%。
, 百拇医药 2、结 果
2.1 肿瘤抑制率的计算 通过计算肿瘤抑制率发现，各用药组对荷瘤鼠体内肿瘤生长均有不同程度的抑制作用，其中八月札和环磷酰胺联合用药组肿瘤抑制率明显高于其他用药组；提示八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，并可能和环磷酰胺之间存在协同作用。详见表1。
2.2 八月札水提物对小鼠血清中SOD、MDA和T-AOC水平的测定通过试验获得各实验组SOD、T-AOC活性和MDA含量的检测结果表明，阳性对照组、药物组、联合用药组同阴性对照组比较均能够明显提高小鼠血清中SOD和T-AOC活性，提高清除自由基、抗氧化应激和维持体内环境活性氧的动态平衡能力；并显著降低MDA水平，减轻脂质过氧化损伤。详见表2。
3、讨 论
SOD具有极强的清除自由基、抗氧化应激功能，MDA的含量可间接估计脂质过氧化的程度。机体防御体系中体内T-AOC的作用主要是维持内环境活性氧的动态平衡，清除过高的活性氧，使机体处于氧化还原相对稳定的状态，代表体内酶类和非酶类抗氧化物的总体水平。
在本实验中，通过计算肿瘤抑制率发现八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，其中八月札和环磷酰胺联合用药组肿瘤抑制率明显高于其他用药组；提示八月札水提物和环磷酰胺之间可能存在协同作用，有待进一步深入研究；各实验组小鼠血清中T-AOC、SOD活性显著高于阴性对照组，MDA含量显著低于阴性对照组，表明八月札水提物能够提高小鼠清除自由基、抗氧化应激和维持体内环境活性氧的动态平衡能力，同时减轻脂质过氧化损伤。
八月札水提物能够显著抑制荷瘤鼠体内肿瘤生长，明显改善荷瘤鼠生存质量，具体机制可能与其有效改善荷瘤鼠体内氧自由基代谢有关。, 百拇医药(白 雪 关宝生 魏晓东 刘丽娜 卞德强 李学臣 王明富 张 涛)