1.6实时荧光定量PCR检测TRAIL及其受体 DR4、 DcR1 mRNA表达

    按Trizol说明书提取总mRNA，紫外线分光光度计检测RNA纯度及完整性，取吸光度(A260/A280)为1.8～2.0的样本，严格按照说明书方法，利用逆转录试剂盒(KaTaRa公司)将RNA逆转录为cDNA，置-80 ℃保存。TRAIL、DR4、DcR1引物由上海生工生物工程公司合成，见表1。按SYBRⅡ说明书进行TRAIL、DR4、DcR1 mRNA表达的检测。反应条件：95 ℃预变性30 s，40个循环；95 ℃变性5 s，60 ℃变性30 s。采集荧光信号及熔解曲线进行分析，应用软件计算各样本的Ct值，应用2-ΔΔCt法计算mRNA相对表达量。

    1.7Western blot检测TRAIL及其受体 DR4、 DcR1蛋白表达

    取两组卵巢颗粒细胞，加入蛋白裂解液冰上裂解30 min，4 ℃离心提取总蛋白，BCA法测定蛋白浓度；蛋白电泳转移蛋白至硝酸纤维素膜上，50 g/L脱脂奶粉封闭2 h ......