1.7 HE染色检测肺血管重构

    组织切片按常规行HE染色，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。在HE染色片上随机选取10个视野测定50～150 μm的肺小动脉，采用Image-ProPlus图像分析系统计算血管横截面管壁面积与血管面积比值(WA%)、肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比(WT%)。

    1.8 Western blot分别检测TMEM16A和PCNA蛋白表达

    取保存于液氮中的肺动脉常规提取组织蛋白，用BCA法测定蛋白浓度，计算上样量后，70 ℃煮蛋白10 min，电泳1.5 h，转膜1.5 h，TBST洗3次、每次5 min，封闭2 h，加一抗4 ℃孵育过夜，洗膜后加二抗室温孵育2 h，倒掉二抗溶液，进行ECL显色。

    1.9 免疫荧光化学法检测各组肺血管平滑肌组织TMEM16A表达组织切片用PBS洗3次、每次3 min，使用动物非免疫血清封闭1 h，PBS洗3次、每次3 min，加入TMEM16A和平滑肌肌动蛋白(SMA)一抗4 ℃过夜16 h，PBS洗3次、每次3 min，加荧光二抗室温1 h ......