1.4 MTT检测细胞存活率

    药物处理结束后，各组细胞吸出原有培养液，每孔加入5 g/L MTT 20 μL继续避光培养4 h，弃上清，加入DMSO 150 μL溶解蓝色的甲瓒颗粒，室温孵育10 min，用酶标仪测定570 nm波长处光密度(D)，计算各组细胞存活率。细胞存活率(%)=(实验组D值/对照组D值) × 100%。实验重复6次，取其平均值。

    1.5 Western blot检测p-Akt蛋白表达

    各组药物处理结束后提取蛋白，测蛋白浓度，以每孔20 μg蛋白上样，用100 g/L的SDS-PAGE凝胶电泳后转移至PDVF膜。用100 g/L BSA封闭液室温封闭1 h，再分别加入p-Akt(1∶1 000)和Akt抗体(1∶1 000)，4 ℃孵育过夜。TBST洗膜后以HRP标记的二抗室温孵育1 h，ECL发光剂显影。用Image J 软件对蛋白条带进行半定量分析 ......