单核细胞特异性KCNQ1基因条件性敲除小鼠模型的建立及初步分析(2)
1.2主要的仪器和试剂CFX 96荧光定量PCR 仪和凝胶成像系统(美国BIO-RAD公司),全自动生化分析仪(日本东芝公司),酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(NEO公司),低温超速离心机(美国SIGMA公司)。
1.3实验方法
1.3.1获得KCNQ1flox/flox/Lyz2-cre+小鼠的交配策略小鼠按雄∶雌=1∶2的比例交配。首先让KCNQ1flox/flox小鼠与特异性表达cre酶的Lyz2-cre+工具鼠进行交配,以获得KCNQ1flox/+/Lyz2-cre+杂合子小鼠。然后让KCNQ1flox/+/Lyz2-cre+杂合子小鼠互相交配,鉴定和筛选后获得基因型为KCNQ1flox/flox/Lyz2-cre+的单核细胞KCNQ1基因条件性敲除小鼠(KCNQ1 cKO小鼠),以同窝出生的基因型为KCNQ1+/+/Lyz2-cre-的小鼠作为野生型(WT)对照。
1.3.2子代小鼠基因型鉴定待鉴定小鼠生长至2周龄时剪取3 mm左右的鼠尾置于1.5 mL的EP管中,加入40 μL的NaOH溶液(50 mmol/L) ......
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