利用慢病毒介导hTERT基因建立永生化髓核细胞系(3)
2 结 果2.1 最佳转染效率的筛选及表达时效的观察
通过荧光电镜观察转染荧光强度及光镜下观察细胞形态与数目显示,MOI为100时转染组的转染效率最高,转染第6天时,转染效率可达到82.9%(图1);绿色荧光表达阳性细胞比例随细胞传代次数的增加,有逐渐减少趋势,但趋势不明显,至培养第90天时,绿色荧光蛋白表达阳性细胞比例约为69.5%。两对照组髓核细胞传到第5代时,生长速度变得缓慢,光镜下观察细胞突起延长,呈梭形,胞质逐渐减少,折光性较差;传至第6代时,细胞演变为长梭形,生长滞缓,并出现老化现象。而pLVX-hTERT转染组细胞传至第15代时,光镜下观察髓核细胞仍呈多角形、短梭形,细胞形态饱满、胞浆丰富,形态正常,细胞代谢旺盛,增殖能力较强,与未转染病毒的前3代髓核细胞形态无明显差异。截止到撰稿时建立的永生化髓核细胞系已传代25代,髓核细胞的形态与活性状态良好。
2.2 各组hTERT基因表达水平
RT-PCR检测结果显示,两对照组的目的基因不表达,而pLVX-hTERT转染组在转染后的第7、15、30、60、90天均可检测到hTERT基因表达 ......
您现在查看是摘要页,全文长 4369 字符。