甲泼尼龙对大鼠心肌缺血再灌注组织的保护作用
【摘 要】目的 探讨甲泼尼龙对大鼠心肌缺血再灌注组织的保护作用。方法 70只大鼠随机分为3组：Ⅰ组(假手术组)、Ⅱ组(缺血再灌注组)和Ⅲ组(甲泼尼龙治疗组)，检测血清IL-1、IL-8和IL-10的动态表达。结果 Ⅲ组相比Ⅱ组心肌的炎症反应明显减弱；同一时相点IL-1、IL-8的表达显著降低(P1 XU Zhongjie2 YANG Tingtong1
(Xinxiang Medical College，Henan Xinxiang 453003)
【Abstract】Objective To study protective effect of methylprednisolone on Inflammatory Response in myocardial ischemia reperfusion injury. Methods 70 rats were randomly divided into 3 groups：Ⅰgroup (sham operation group)、Ⅱgroup (IR group) and Ⅲ group (methylpre-dnisolone-treated group). Examinethe the levels of serum IL-1、8 and IL-10. Results Compared with Ⅱgroup，inflammatory response in Ⅲ group weaken clearly，IL-1、8 were lower(P[1、2]。类固醇激素对炎症反应的抑制作用正逐步得到人们重视，本文通过建立动物MIRI模型，探讨甲泼尼龙对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组 健康SD成年大鼠共70只，体重200±20g，雌雄不限，由新乡医学院实验动物中心提供。随机分为3组：Ⅰ组(假手术组，n=10)、Ⅱ组(缺血再灌注组，n=30))和Ⅲ组(甲泼尼龙治疗组，n=30)。后两组再按以下时相点随机分为6个亚组：缺血 0.5h，再灌注2h、4h、8h、12h、24h(每亚组n=5)。Ⅰ组只设12h一个时相点作为总体对照。
1.2 实验方法
1.2.1 MIRI动物模型建立 20%乌拉坦2ml﹒kg-1腹腔麻醉，暴露右股静脉，药物组注入甲泼尼龙30mg﹒kg-1。对照组及模型组注入灭菌生理盐水0.75mg﹒kg-1。在胸骨左缘第3~5肋间切口，暴露胸腔，小银夹夹闭左冠状动脉前降支，记录Ⅱ导心电图。30min后松开银夹即行心肌再灌注。对照组只开胸不夹闭。
, 百拇医药
制模成功标准：(1)Ⅱ导心电图ST-T明显抬高，松开钳夹后抬高的ST-T下降1/3以上；(2)钳夹后左心室前壁由红色变成暗红色，再灌注成功时左室前壁由暗红色迅速或逐渐恢复为红色。
1.2.2 标本制作 在上述各组各时段末，取心脏，固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。
1.2.3 血清IL-1、8、10浓度测定 各组于各时段末后腔静脉穿刺抽血3ml，室温静置3h，1500r﹒min-1离心10min，取上清于-20℃冷冻保存，测定方法采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附法(ELISA)，具体操作按说明书进行。
1.3 统计学处理 采用SPSS10.0软件包做统计处理，参数以均数±标准差(x±s)表示，以P-1)的变化
与Ⅰ组比较，Ⅱ组与Ⅲ组各时段的IL-1、IL-8浓度均升高 (P[3~4]。IL-1和IL-8是两种典型的炎症介质，在MIRI中起启动和介导炎症反应的作用。在心肌缺血的早期阶段，IL-1可通过上调细胞间粘附分子的表达而介导炎症细胞向心肌的浸润，并导致微血管阻塞，释放出大量的炎性介质。IL-8不能被血清灭活，因此能在局部累积发挥持续作用[5]，其作用与炎症关系密切，可以趋化并激活中性粒细胞，进一步发挥细胞毒作用，损害心肌细胞。与前两者相反，IL-10是一种有效的抗炎因子，在MIRI的病理损伤中能抑制IL-1、IL-8和TNF-α等多种炎症因子，减轻心肌炎症，发挥对心脏的保护作用[6]。
, 百拇医药
目前，类固醇激素对MIRI的保护作用机制尚不明确。本文着重探讨甲泼尼龙对炎症因子IL-1、8和抗炎因子IL-10的影响及其保护缺血再灌注心肌的机理。结果显示，心肌缺血早期即出现血清IL-1和IL-8明显升高，再灌注后升高更显著，相同时段内药物组血清IL-1、8水平均明显低于模型组(P0.05)，说明外源性的类固醇激素可以抑制内源性IL-10的分泌。
总之，在MIRI病程中，炎症细胞释放的各种细胞因子通过不同的致炎和抗炎途径参与其病理过程，而细胞因子失衡是影响MIRI发生发展及预后的重要因素。本研究证明了类固醇激素可以通过抑制IL-1与IL-8的分泌而发挥对缺血再灌注心肌的保护作用，但其作用机制还有待于进一步的研究。
参考文献
[1] Chamorro A. Role of inflamemation in stroke and atherothrombosis[J].Cerebrovasc Dis，2004，17(suppl 3)：1-5
, 百拇医药
[2] Saeed SA，Waqar MA，Zubairi AJ，et al. Myocardial ischaemia and reperfusion injury： reactive oxygen species and the role of neutrophil [J]. J Coll Physicians Surg Pak，2005，15(8 ) ： 507-514
[3] 王育珊，王骥，王广，等.急性心肌梗死患者缺血再灌注过程中血清白介素-6、白介素-8的动态变化及意义[J] .中华心血管病杂志，2004，32(1)：35-38
[4] 盛西陵，王东明，陈畅.内源性白介素-10在心肌缺血再灌注损伤中的作用[J] .中华急诊医学杂志，2004，13(10)：676-678
[5] 余传霖，熊思东.分子免疫学[M].上海：复旦大学出版社，2001，390-391
[6] Boehler A.The role of interleukin-10 in lung transplantation[J].Transpl Immunol，2002，9：121-124, http://www.100md.com(武俊芳 许重洁 杨廷桐)
(Xinxiang Medical College，Henan Xinxiang 453003)
【Abstract】Objective To study protective effect of methylprednisolone on Inflammatory Response in myocardial ischemia reperfusion injury. Methods 70 rats were randomly divided into 3 groups：Ⅰgroup (sham operation group)、Ⅱgroup (IR group) and Ⅲ group (methylpre-dnisolone-treated group). Examinethe the levels of serum IL-1、8 and IL-10. Results Compared with Ⅱgroup，inflammatory response in Ⅲ group weaken clearly，IL-1、8 were lower(P[1、2]。类固醇激素对炎症反应的抑制作用正逐步得到人们重视，本文通过建立动物MIRI模型，探讨甲泼尼龙对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。
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1 材料与方法
1.1 实验动物与分组 健康SD成年大鼠共70只，体重200±20g，雌雄不限，由新乡医学院实验动物中心提供。随机分为3组：Ⅰ组(假手术组，n=10)、Ⅱ组(缺血再灌注组，n=30))和Ⅲ组(甲泼尼龙治疗组，n=30)。后两组再按以下时相点随机分为6个亚组：缺血 0.5h，再灌注2h、4h、8h、12h、24h(每亚组n=5)。Ⅰ组只设12h一个时相点作为总体对照。
1.2 实验方法
1.2.1 MIRI动物模型建立 20%乌拉坦2ml﹒kg-1腹腔麻醉，暴露右股静脉，药物组注入甲泼尼龙30mg﹒kg-1。对照组及模型组注入灭菌生理盐水0.75mg﹒kg-1。在胸骨左缘第3~5肋间切口，暴露胸腔，小银夹夹闭左冠状动脉前降支，记录Ⅱ导心电图。30min后松开银夹即行心肌再灌注。对照组只开胸不夹闭。
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制模成功标准：(1)Ⅱ导心电图ST-T明显抬高，松开钳夹后抬高的ST-T下降1/3以上；(2)钳夹后左心室前壁由红色变成暗红色，再灌注成功时左室前壁由暗红色迅速或逐渐恢复为红色。
1.2.2 标本制作 在上述各组各时段末，取心脏，固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。
1.2.3 血清IL-1、8、10浓度测定 各组于各时段末后腔静脉穿刺抽血3ml，室温静置3h，1500r﹒min-1离心10min，取上清于-20℃冷冻保存，测定方法采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附法(ELISA)，具体操作按说明书进行。
1.3 统计学处理 采用SPSS10.0软件包做统计处理，参数以均数±标准差(x±s)表示，以P-1)的变化
与Ⅰ组比较，Ⅱ组与Ⅲ组各时段的IL-1、IL-8浓度均升高 (P[3~4]。IL-1和IL-8是两种典型的炎症介质，在MIRI中起启动和介导炎症反应的作用。在心肌缺血的早期阶段，IL-1可通过上调细胞间粘附分子的表达而介导炎症细胞向心肌的浸润，并导致微血管阻塞，释放出大量的炎性介质。IL-8不能被血清灭活，因此能在局部累积发挥持续作用[5]，其作用与炎症关系密切，可以趋化并激活中性粒细胞，进一步发挥细胞毒作用，损害心肌细胞。与前两者相反，IL-10是一种有效的抗炎因子，在MIRI的病理损伤中能抑制IL-1、IL-8和TNF-α等多种炎症因子，减轻心肌炎症，发挥对心脏的保护作用[6]。
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目前，类固醇激素对MIRI的保护作用机制尚不明确。本文着重探讨甲泼尼龙对炎症因子IL-1、8和抗炎因子IL-10的影响及其保护缺血再灌注心肌的机理。结果显示，心肌缺血早期即出现血清IL-1和IL-8明显升高，再灌注后升高更显著，相同时段内药物组血清IL-1、8水平均明显低于模型组(P0.05)，说明外源性的类固醇激素可以抑制内源性IL-10的分泌。
总之，在MIRI病程中，炎症细胞释放的各种细胞因子通过不同的致炎和抗炎途径参与其病理过程，而细胞因子失衡是影响MIRI发生发展及预后的重要因素。本研究证明了类固醇激素可以通过抑制IL-1与IL-8的分泌而发挥对缺血再灌注心肌的保护作用，但其作用机制还有待于进一步的研究。
参考文献
[1] Chamorro A. Role of inflamemation in stroke and atherothrombosis[J].Cerebrovasc Dis，2004，17(suppl 3)：1-5
, 百拇医药
[2] Saeed SA，Waqar MA，Zubairi AJ，et al. Myocardial ischaemia and reperfusion injury： reactive oxygen species and the role of neutrophil [J]. J Coll Physicians Surg Pak，2005，15(8 ) ： 507-514
[3] 王育珊，王骥，王广，等.急性心肌梗死患者缺血再灌注过程中血清白介素-6、白介素-8的动态变化及意义[J] .中华心血管病杂志，2004，32(1)：35-38
[4] 盛西陵，王东明，陈畅.内源性白介素-10在心肌缺血再灌注损伤中的作用[J] .中华急诊医学杂志，2004，13(10)：676-678
[5] 余传霖，熊思东.分子免疫学[M].上海：复旦大学出版社，2001，390-391
[6] Boehler A.The role of interleukin-10 in lung transplantation[J].Transpl Immunol，2002，9：121-124, http://www.100md.com(武俊芳 许重洁 杨廷桐)