环介导恒温扩增技术快速检测大肠杆菌O157特异基因的建立(1)
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[摘要]目的建立环介导的恒温扩增快速检测大肠杆菌O157的方法。方法采用环介导的恒温扩增反应(LAMP)技术扩增大肠杆菌O157特异性基因，并与传统PCR比较。结果与传统的PCR技术相比，LAMP法更加简便快速、且在等温条件下进行，具有更高的灵敏性；特异性100%。结论该方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备、为临床检测大肠杆菌O157提供了一个快速简便的新方法。
关键词：核酸 环介导等温扩增 大肠杆菌O157 检测
中图分类号：R446.139文献标识码：A文章编号：1672-5085(2007)7-0059-03
肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157患者在起病早期即可出现严重并发症，引起肝肾功能不全、凝血功能异常，出现全身炎症反应，甚至多器官功能衰竭；因此对其高效、准确的检测在预防和治疗肠出血性大肠杆菌O157患者中至关重要；近年来，病原体检测技术突飞猛进，日益成为诊断肠出血性大肠杆菌O157的有力工具，但目前的检测方法技术含量比较高，对操作要求、设备条件、工作环境均有较高的标准，仍不能进行广泛的普及和推广，特别是在医疗条件相对落后的地区更难以深入开展。更重要的是，由于大肠杆菌O157感染剂量极低,病程急,病情重,因此，筛检大肠杆菌O157的方法是否灵敏、特异及快速至关重要[1]。
环状介导的恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification of DNA, 简称LAMP)是核酸扩增的一种新方法，该方法在等温条件下能高特异性、高效、快速地扩增DNA。该方法操作简单易行，仅需要4条合适的引物、1 种DNA聚合酶、1个水浴箱或隔热装置即可进行。其终产物是一种混和物，由多个不同茎长的茎-环状结构的DNA 和在相同链中通过退火目的序列不断翻转复制而成的多样的环状结构所构成的花椰菜样结构所组成。 另外，检测产物的方法简单易行且选择性高。
1 材料和方法
1.1 菌株
肠出血性大肠杆菌O157菌株购于卫生部临检中心，金黄色葡萄球菌.痢疾志贺菌来源于省疾控中心，菌株接种营养琼脂斜面,37℃培养18h,转接3次后备用 ......
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