细胞粘附分子引起脑缺血再灌注损伤机制的研究(2)
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1.3 粘附因子ICAM-1、P、E-selection mRNA 的检测：冰冻切片室温干燥1h，DEPC处理的双蒸水洗5min3次，轻微振荡。切片上滴加3%柠檬酸新鲜配制的胃蛋白酶，37℃消化5min以暴露mRNA核酸片段；每张切片滴加杂交液20ul孵育2小时，滴加20ul含地高辛标记的多相孤寡核苷酸探针杂交液，盖上原位杂交专用盖玻片，恒温箱42℃杂交过夜。
1.4 粘附因子ICAM-1、P-selection、E-selection和GFAP蛋白的检测：冰冻切片室温干燥1h，冲洗后滴加酶修复液，并进行非特异性IgG的封闭和阻断；滴加适当稀释比例第一抗体4℃孵育过夜。分别滴加各种特异性生物标记抗体，冲洗后避光显色5分钟或更长时间，至显色，自来水中终止反应。
1.5 数据的处理：采用SPSS 13.0统计分析软件，进行单因数方差分析(one-wayANOVA)和相关性分析 ......
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