松针油引起人乳腺癌MCF7凋亡、自噬的机制研究(2)
2.4 P53基因检测及LC3-II蛋白取以上细胞108个，1000r/min，离心10min后，丢弃上清，PBS洗涤后，加入鼠抗人P53 2FITCul在室温下避光保存30min，用流式细胞仪进行测试。
2.5 端粒酶活性检测
根据PRAP的原理，按PRAP-PCR端粒酶检测试剂盒的说明进行端粒酶活性的检测。MCF7细胞提取物以考马斯亮蓝蛋白定量法进行蛋白定量的提取，各组提取的蛋白含量相一致，将等量细胞提取物加入TRAP反应体系中，用30℃孵化30min，使端粒酶延长TS引物，然后进行三步的PCR(94℃，5s；59℃，44s)循环30次，用10%的非变性PAGE进行PCR产物分析，用硝酸银染色凝胶后观察并摄像，测定波长在450nm和690nm的吸光度的D值，后根据△D=D450-D690，并计算。
2.6 MDC荧光法检测乳腺癌细胞自噬
药物处理后，取1ml/L加入1ul MDC(50umol/L)染液，37℃反应10min，去掉上清夜，用1×PBS漂洗3次，用356nm发射滤片和545nm阻断滤片，用荧光显微镜观察细胞，并且拍照，细胞内的蓝色亮亮的颗粒为自噬泡，含有10或以上的荧光颗粒细胞为自噬泡阳性细胞 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4743 字符。