李 彪 兰 静 肖 鸣(内江市第一人民医院口腔科内江641000)

    腺病毒及脂质体法介导脐静脉内皮细胞转染的实验研究

    李彪兰静肖鸣(内江市第一人民医院口腔科内江641000)

    目的：利用腺病毒载体和脂质体转染脐静脉内皮细胞探讨转染脐静脉内皮细胞的理想条件。方法：分别使用腺病毒载体和Lipofectamine 2000脂质体介导VEGF165基因转染脐静脉内皮细胞。转染后通过倒置荧光显微镜检测转染效率，对比探讨转染脐静脉内皮细胞的理想方法。结果：采用脂质体法转染脐静脉内皮细胞效果不理想，转染率约11.60%。采用腺病毒载体转染率明显高于脂质体法，且随感染复数增加而增加。结论：采用腺病毒介导VEGF165转染脐静脉内皮细胞较脂质体法转染效率高，当M0I= 50时可作为转染安全有效的条件.这为细胞转染技术在脐静脉内皮细胞的研究提供实验基础。

    脐静脉内皮 细胞细胞转染 腺病毒载体 脂质体转染

    种子细胞的培养是组织工程的基本要素，VEGF是目前已知诱导血管再生作用最强的生长因子，但人工添加VEGF的活性时间短。Hudson N等[1]研究认为如果在正常氧分压下VEGF165的生物半衰期30～45min，在低氧环境下是6～8h。参与血管形成的主要细胞是内皮细胞，通过内皮细胞的迁移、增殖、分化和结构重建形成新的毛细血管网[2]。许多研究证实，通过将特定的目的基因转染到细胞内可以使目的基因长期稳定持续性表达。如能将VEGF基因转导至内皮细胞，使其能保持局部VEGF高浓度活性促进血管再生。转染的关键之一是将VEGF基因安全有效转入靶细胞中并持续表达，因此需要寻求转染脐静脉内皮细胞的合适方法。本实验选择脐静脉内皮细胞为实验对象，用不同腺病毒滴度及不同脂质体浓度转染脐静脉内皮细胞，探讨适合脐静脉内皮细胞转染的有效条件。

    1 材料与方法

    1.1材料：腺病毒过表达载体pHBAd-MCMV-GFP-VEGF165以及质粒pIRES-GFP-VEGF165构建(汉恒生物有限公司)，HUVECs(Sciencell公司)，DMEM培养基(北京赛默飞世尔生物化学有限公司) ......