补肾填精含药血清对成骨细胞增殖\分化及碱性磷酸酶活性检测的研究(2)
![]() |
第1页 |
参见附件。
1.3 药物及含药血清制备:
①福善美,杭州默沙东制药有限公司生产,用量:70mg/片,每周一片,生产批号:120511;②金刚健骨片,由补骨脂、熟地黄、川牛膝、鹿角胶、菟丝子、肉苁蓉、杜仲、粉萆、山药组成,购自湖南中医药大学附属第一医院药剂科,用量:0.3g/片,一次10片,一日3次,生产批号:20120924;③骨松宝,由淫羊藿、赤芍、三棱、莪术等组成,贵州富华药业有限责任公司生产,用量,0.5g/粒,一次2粒,一日3次,生产批号:20120503;④生理盐水购自国药集团。
以上药物按照人与大鼠剂量换算公式折算为大鼠每天的等效剂量,连续灌胃2次,间隔2次,于末次给药1h后,以3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后经腹主动脉采取全血,室温静置2小时后以1500rpm离心20min,吸出上层血清,一次性滤器抽滤除菌,56℃灭活30min后分装待用,保存于-80℃冰箱。
1.4 成骨细胞的体外提取及培养:
取新生24h内SD大鼠5只,浸没于75%酒精10min,脱颈处死后在无菌条件下分离大鼠颅盖骨;PBS反复清洗以清除骨片表面附着的血管、粘膜等结缔组织;以眼科剪将骨组织剪碎,碎片约1mm3;以5ml 0.25%胰蛋白酶将骨片消化20min;弃胰蛋白酶消化液,加入5ml 0.1%I型胶原蛋白酶37℃恒温气浴震荡消化45min,收集上清液,转移至新的离心管,1000r/min离心5min;将剩余骨片在0.1%I型胶原蛋白酶中重复消化2次,1000r/min离心5min;将三次所得细胞以MEM培养液(含15%FBS)反复吹打混匀,制成细胞悬液,以105/ml的密度接种于25cm2培养瓶中,置于5%CO2培养箱中37℃培养;每天于倒置显微镜下观察细胞生长状态,隔天换液一次。当细胞生长至汇合时,以0.25%胰蛋白酶消化细胞,按1:3传代培养,第三代细胞用于后续实验。
1.5 实验分组及干预方案:
本研究共分四组:①福善美组(10%福善美含药血清+MEM培养基+双抗)②金刚健骨片组(10%金刚健骨片含药血清+MEM培养基+双抗)③骨松宝组(10%骨松宝含药血清+MEM培养基+双抗)④对照组(10%生理盐水含药血清+MEM培养基+双抗)
1 ......
您现在查看是摘要介绍页,详见PDF附件。