RNA干扰沉默卵巢癌SW626细胞CXCR4基因的表达(2)

http://www.100md.com 2014年6月1日 汤容

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     siRNA介导的RNA干扰技术是一种转录后水平的基因沉默(posttranscriptional gene silencing，PTGS)，为哺乳动物基因功能的研究提供了强大的工具。RNA干扰可以完全下调特定蛋白的表达能力，是基因功能研究的重要方法。

    本实验中，我们通过RNA干扰，使目的基因CXCR4基因沉默，从而进一步研究CXCR4基因的功能以及其在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌细胞生物学行为的影响。在本实验中，我们针对CXCR4基因设计了两条RNA干扰序列，并经BLAST查询对比无同源基因，化学合成两条特异的siRNA，通过脂质体转染至卵巢癌细胞中，第二天在显微镜下观察，实验S1组和S2组细胞形态不佳，折光性变差，并随时间的推移，活细胞数明显减少，大量死细胞悬浮；在荧光显微镜下观察，实验组的细胞体积缩小、细胞皱缩、细胞解离成彼此黏附成团的圆形小体-凋亡小体，说明转染siRNA后，卵巢癌细胞的凋亡增加进而引发细胞的生长受抑制，而空白对照组和阴性对照组细胞形态和生长速度正常。Western blot结果显示转染siRNA组与空白对照组和阴性对照组相比，CXCR4蛋白表达降低。本实验还运用MTT法检测转染后24h、48h、72h卵巢癌细胞的存活率，计算出细胞的增殖抑制率，实验结果显示干扰组细胞增殖抑制率24h、48h、72h分别为33.23%和30.21%、33.39%和29.68%、27.68%和30.46%，明显高于阴性对照组。这些结果表明RNA干扰CXCR4基因后卵巢癌细胞的增殖受到明显抑制，抑制CXCR4基因可以减缓肿瘤的生长，因此，CXCR4基因有可能成为卵巢癌基因治疗的靶基因，为卵巢癌治疗提供了一个新的选择。但是，本研究仅仅是初步探讨，只实验了一个卵巢癌细胞系，且只是体外实验，尚需要进一步扩展到其他的卵巢癌细胞系，并进行体内实验，以取得更多的实验数据，以更好的找到对卵巢癌的治疗方法。

    参考文献

    [1] 鲁艳明，张淑兰，赵彦艳. HRE-2基因沉默对卵巢癌细胞体外增殖能力的影响[J].中华肿瘤防治杂志.2006，13(22)：1689-1693.

    [2] 林远洪，吴永忠，黄环，等.RNAi沉默EGFR基因在卵巢癌裸鼠移植瘤的成瘤抑制作用[J].重庆医科大学学报.2009，34(3)：265-268.

    [3] 刘思源，张玉想，杨劲松.RNA干扰PPO基因抑制卵巢癌细胞生长[J].中国肿瘤临床.2006，33(21)：1210-1213.

    http://www.100md.com/html/paper/1672-8602/2014/06/09-1.htm

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