1.2 核酸提取

    检测仪器为Roche品牌，LightCycler2.0卡盘式全自动荧光定量PCR仪，反应试剂盒由江苏硕世有限公司提供。

    1.3 病毒分离

    采用MDCK细胞分离法来进行病毒分离，将已经成长为单层的MDCK细胞倒去生长液，用Hank’s液洗两遍，加入1ml不含牛血清的维持液，至35℃孵育。第二天开始观察细胞病变(CPU)，当出现80%以上的CPU时冻存。采用微量半加敏血球凝集抑制试验(HI)，鉴定性别及亚型[3]。

    1.4 荧光RT-PCR扩增

    根据流感病毒A型、B型基因序列，利用引物设计软件设计引物和探针 ......