荧光定量RT-PCR在流感病毒检测上的应用研究(2)
1.2 核酸提取
检测仪器为Roche品牌,LightCycler2.0卡盘式全自动荧光定量PCR仪,反应试剂盒由江苏硕世有限公司提供。
1.3 病毒分离
采用MDCK细胞分离法来进行病毒分离,将已经成长为单层的MDCK细胞倒去生长液,用Hank’s液洗两遍,加入1ml不含牛血清的维持液,至35℃孵育。第二天开始观察细胞病变(CPU),当出现80%以上的CPU时冻存。采用微量半加敏血球凝集抑制试验(HI),鉴定性别及亚型[3]。
1.4 荧光RT-PCR扩增
根据流感病毒A型、B型基因序列,利用引物设计软件设计引物和探针 ......
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