摘要：目的构建重组羧肽酶原B甲醇酵母工程菌株。方法将羧肽酶原B编码基因整合入酵母质粒，电转化至甲醇酵母中，His缺陷培养基和G418抗性筛选获得阳性克隆株。用大肠杆菌表达的羧肽酶原B免疫家兔制备羧肽酶原B兔抗血清；经发酵、甲醇诱导后，蛋白质印迹(Western-blotting)免疫检测蛋白质的表达。结果获得高抗体滴度的羧肽酶原B兔抗血清，蛋白质印迹免疫检测重组酵母经甲醇诱导表达后的上清阳性。结论获得了重组羧肽酶原B甲醇酵母工程菌株，可分泌表达重组羧肽酶原B。

    关键词：羧肽酶原B；甲醇酵母；表达；多克隆抗体制备；蛋白质印迹

    中图分类号：Q556文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)11-0005-03

    Construction and Secreted Expression of Recombinant Procarboxypeptidase B in Pichia pastoris

    LI Su-xia, YUAN Qin-sheng

    (State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China) ......