摘要：目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子，观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列，与pET-28琏接后。转化EcoliBL21(DE3)，IPTG诱导表达，并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性。结果重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析，证明构建正确。转化EcoliBL21(DE3)后，重组蛋白获得可溶性表达。纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光。结论Arg7具有很好的转导活性，能携带与其连接的蛋白质穿过HeLa细胞膜。

    关键词：多聚精氨酸；蛋白转导域；HeLa细胞

    中图分类号：R966

    文献标识码：A

    文章编号：1672-979X(2010)05-0158-04

    蛋白转导域(protein transduction domain，PTD)是一类能携带其它生物大分子(蛋白质、多肽等)穿过多种哺乳细胞膜的短肽。由PTD介导的蛋白跨膜过程称为转导。蛋白转导现象最初是通过研究HIV-1的反式激活蛋白(TAT，47～57位氨基酸)发现的，目前已发现十多种小肽具有携带外源蛋白进行跨膜转运的功能。研究发现，许多蛋白转导域序列中均富含精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys) ......