HPLC测定葛根汤颗粒中葛根素的含量
摘要：目的建立RP.HPLc测定葛根汤颗粒中葛根素含量的方法。方法采用HPLC法，c，。色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 p.m)，以乙腈.甲醇一水(10：8：82)为流动相，检测波长250 nln。结果葛根素浓度在4.008～200.4 ug/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，y=0.012 6x+0.014 1，r=1.0000(n=6)，平均回收率100.02%，RSD 0.1%。结论此方法简便、准确，可作为葛根汤颗粒的质量控制方法。
关键词：葛根汤颗粒：葛根素：HPLC；含量测定
中图分类号：R282.71
文献标识码：A
文章编号：1672-979x(2010)09-0330-03
葛根汤始载于《金匮要略》，由葛根、麻黄、桂枝、芍药、炙甘草、生姜、红枣7味药组成，临床主治发热无汗、恶心、身病、项背强、口禁等症，是历代中医学推崇的名方之一。葛根是葛根汤的君药，解肌退热，生津，透疹，升阳止泻。用于外感发热头痛、颈背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻团。葛根素是葛根中的主要成分之一，本实验建立了葛根汤颗粒中葛根素的RP-HPLC含量测定方法，可有效地控制葛根汤颗粒的质量，方法简便、准确、可靠。
, 百拇医药
1仪器与试药
1.1仪器
Agilentl200高效液相色谱仪、二极管阵列检测器 (美国安捷伦)；CP-225D电子分析天平；超声清洗机(300 w，40 kHz)KS-300E超声清洗器(宁波科技仪器厂)。
1.2试药
葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)；葛根汤颗粒(山东瑞阳制药)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：C18柱(250mmX4.6 rflln，5 jz-n)，流动相：乙腈.甲醇一水(10：8：82)，流速：1.0 mL/min，检测波长：250n/n，柱温：30℃，进样量：10ul。
, 百拇医药
2.2对照品溶液的制备
精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇溶解并制成每1 mL含200.4ug的溶液，作为对照品储备溶液。精密量取l mL置10 mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备
取葛根汤颗粒10包，混匀，约取1.0 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加30%乙醇适量，超声处理30 min，放冷，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置。精密量取15 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，5 g)上，用30%乙醇洗脱，收集洗脱液，置50 mL量瓶中，洗脱至刻度，摇匀，即得。
2.4阴性样品溶液的制备
按全方比例，剔除葛根后制备成颗粒，得缺葛根的阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。
, 百拇医药
2.5系统适用性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各20 uL，注入液相色谱仪，按色谱条件测定，记录色谱图，见图1。结果显示，阴性样品溶液的色谱图在葛根素保留时间的相应位置上无峰出现，表明此方法专属性强，阴性对照无干扰。
2.6标准曲线的制备
分别精密吸取葛根素对照品储备液1，2，5，10，25 mL置50 mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度。将5种浓度的对照品溶液，按色谱条件，分别进样20 uL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程为y=0.012 6x+0.014 1，r=1.000 0，线性范围4.008-200.4ug/mL。
2.7精密度试验
精密吸取对照品储备溶液5 niL到50 mL容量瓶中.加30%乙醇溶液稀释至刻度，作为对照品溶液。精密吸取20 0L，连续进样5次，测得葛根素峰面积平均值为1 595，RSD=0.3%，表明精密度良好。
, 百拇医药
2.8重复性试验
取同一批供试品，按样品测定项的方法，连续测定5份，得葛根素平均峰面积值为1902，葛根素平均含量为1.99mg/g，RSD=0.3%。表明方法重现性良好。
2.9溶液稳定性实验
精密吸取供试品溶液20 uL，分别在制备后0，4，8，12，24 h进样，测定峰面积，RSD=0.6%。表明样品在24 h内稳定。
2.10加样回收率试验
取已知含量葛根汤颗粒5份，每份1.0 g，分别加入葛根素对照品储备液3，3，4，4，5，5 mL，按“2.3”项提取，制备供试品溶液，进样量均为20 uL，测定峰面积，计算，结果见表1。
2.11含量测定
分别精密称取3批样品，按样品溶液制备项方法制备，分别取20uL注入液相色谱仪，依法测定，结果见表2。
3讨论
本文以《中国药典》2005年版中药材葛根项的高效液相色谱方法为基础，建立了测定葛根汤颗粒的主成分葛根素含量的方法，并分别考察了精密度、稳定性、重现性和回收率。结果表明建立的方法能有效地控制葛根汤颗粒的质量。, http://www.100md.com(赵昌军 刘宏明)
关键词：葛根汤颗粒：葛根素：HPLC；含量测定
中图分类号：R282.71
文献标识码：A
文章编号：1672-979x(2010)09-0330-03
葛根汤始载于《金匮要略》，由葛根、麻黄、桂枝、芍药、炙甘草、生姜、红枣7味药组成，临床主治发热无汗、恶心、身病、项背强、口禁等症，是历代中医学推崇的名方之一。葛根是葛根汤的君药，解肌退热，生津，透疹，升阳止泻。用于外感发热头痛、颈背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻团。葛根素是葛根中的主要成分之一，本实验建立了葛根汤颗粒中葛根素的RP-HPLC含量测定方法，可有效地控制葛根汤颗粒的质量，方法简便、准确、可靠。
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1仪器与试药
1.1仪器
Agilentl200高效液相色谱仪、二极管阵列检测器 (美国安捷伦)；CP-225D电子分析天平；超声清洗机(300 w，40 kHz)KS-300E超声清洗器(宁波科技仪器厂)。
1.2试药
葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)；葛根汤颗粒(山东瑞阳制药)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：C18柱(250mmX4.6 rflln，5 jz-n)，流动相：乙腈.甲醇一水(10：8：82)，流速：1.0 mL/min，检测波长：250n/n，柱温：30℃，进样量：10ul。
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2.2对照品溶液的制备
精密称取葛根素对照品适量，加30%乙醇溶解并制成每1 mL含200.4ug的溶液，作为对照品储备溶液。精密量取l mL置10 mL量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备
取葛根汤颗粒10包，混匀，约取1.0 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加30%乙醇适量，超声处理30 min，放冷，用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置。精密量取15 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，5 g)上，用30%乙醇洗脱，收集洗脱液，置50 mL量瓶中，洗脱至刻度，摇匀，即得。
2.4阴性样品溶液的制备
按全方比例，剔除葛根后制备成颗粒，得缺葛根的阴性样品，照供试品溶液制备项下方法制备阴性样品溶液。
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2.5系统适用性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各20 uL，注入液相色谱仪，按色谱条件测定，记录色谱图，见图1。结果显示，阴性样品溶液的色谱图在葛根素保留时间的相应位置上无峰出现，表明此方法专属性强，阴性对照无干扰。
2.6标准曲线的制备
分别精密吸取葛根素对照品储备液1，2，5，10，25 mL置50 mL容量瓶中，加30%乙醇至刻度。将5种浓度的对照品溶液，按色谱条件，分别进样20 uL，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程为y=0.012 6x+0.014 1，r=1.000 0，线性范围4.008-200.4ug/mL。
2.7精密度试验
精密吸取对照品储备溶液5 niL到50 mL容量瓶中.加30%乙醇溶液稀释至刻度，作为对照品溶液。精密吸取20 0L，连续进样5次，测得葛根素峰面积平均值为1 595，RSD=0.3%，表明精密度良好。
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2.8重复性试验
取同一批供试品，按样品测定项的方法，连续测定5份，得葛根素平均峰面积值为1902，葛根素平均含量为1.99mg/g，RSD=0.3%。表明方法重现性良好。
2.9溶液稳定性实验
精密吸取供试品溶液20 uL，分别在制备后0，4，8，12，24 h进样，测定峰面积，RSD=0.6%。表明样品在24 h内稳定。
2.10加样回收率试验
取已知含量葛根汤颗粒5份，每份1.0 g，分别加入葛根素对照品储备液3，3，4，4，5，5 mL，按“2.3”项提取，制备供试品溶液，进样量均为20 uL，测定峰面积，计算，结果见表1。
2.11含量测定
分别精密称取3批样品，按样品溶液制备项方法制备，分别取20uL注入液相色谱仪，依法测定，结果见表2。
3讨论
本文以《中国药典》2005年版中药材葛根项的高效液相色谱方法为基础，建立了测定葛根汤颗粒的主成分葛根素含量的方法，并分别考察了精密度、稳定性、重现性和回收率。结果表明建立的方法能有效地控制葛根汤颗粒的质量。, http://www.100md.com(赵昌军 刘宏明)