对非对映立体异构体，然后再分离，也称柱前衍生化法或手性衍生化试剂法。直接法则不需要做柱前衍生化处理，直接以手性固定相或手性流动相拆分，直接法的分离原理是手性对映体之一与手性固定相或流动相添加剂间发生分子间的三点作用，形成稳定络合物，另一对映体仅发生两点作用，形成不稳定的络合物，通过手性流动相的洗脱使两个对映异构体分离。

    Davank04161首次将L-脯氨酸键合到聚苯乙烯树脂上作为手性选择子，引入铜离子形成铜离子配合物，第一次实现液相色谱完全分离对映异构体，证明了配体交换色谱的实际应用价值。李元宰等利用HPLC，用多糖类手性固定相Chiralcel OD柱分离一系列a-氨基酸的邻苯二甲酰衍生物对映体，拆分效果良好(a=1.34-2.11)，而且全部得到了基线拆分。陈峰等利用Baseline LEC-L10为手性固定相的配体交换色谱法手性分离合成6种消旋B-苯丙氨酸，得到了满意的拆分色谱图，基本达到基线分离。黄可辛等用L-a-三氟乙酰氧基丙酰氯经GC拆分(d1)-缬氨酸、(d1)-亮氨酸和(d1)-蛋氨酸 ......