流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的研究
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[摘要]目的：探讨流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒是否具有诱导肿瘤细胞凋亡的能力。方法：流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别以20 m.o.i.感染Hela细胞，于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞超微结构的改变， Annexin-VFITC/PI流式细胞仪进行凋亡定量分析。结果：流感病毒作用于Hela细胞后6 h电镜下即可见细胞凋亡的改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高，于12～24 h达高峰，流感病毒诱导凋亡百分率最高达40.2%，紫外线照射后的流感病毒最高达16.4%。结论：流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒均有诱导肿瘤细胞凋亡的能力，但流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡的能力要比经紫外线照射后的流感病毒强。
[关键词]流感病毒；肿瘤细胞；细胞凋亡
[中图分类号]R73[文献标识码]B [文章编号]1673-7210(2007)05(c)-150-02
细胞凋亡是细胞在生理或病理信号刺激下，启动自身凋亡相关基因而发生的主动“自杀”过程。近年来的研究表明，流感病毒可诱导多种细胞发生细胞凋亡，包括其容纳细胞和非容纳细胞，由于流感病毒可诱导多种肿瘤细胞发生细胞凋亡，因此认为这可能是肿瘤治疗的一条新途径。本研究选择了非容纳细胞(Hela细胞)，体外观察流感病毒与经紫外线照射后的流感病毒分别诱导其凋亡的作用。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 病毒与细胞A型流感病毒购自华西医科大学典型培养物保藏中心， Hela细胞为大连医科大学微生物教研室保存的传代细胞，在含有10%小牛血清的MEM培养基中培养传代。
1.1.2 主要试剂与仪器Annexin-V-FITC/PI Staining试剂盒购自Roche公司。透射电子显微镜(JEM-2000EX)，流式细胞仪(FACS V antage TMSE)，酶标仪(model 3550，biorad公司)。
1.2 方法
1.2.1 病毒培养将A型流感病毒接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔，37℃孵育72 h，收获尿囊液，检测血凝效价，取血凝效价>1∶640的尿囊液低温保存备用。
1.2.2 肿瘤细胞凋亡的诱导Hela细胞长至80%单层(悬浮细胞于对数生长期)时，按20 m.o.i.加入病毒液1 ml/瓶[1]，37℃吸附1 h，吸出病毒液，加入含2%小牛血清的维持液继续培养 ......
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