4.1.7 ELISPOT板判读使用显微镜计数斑点的方法费时、费力，结果依赖个人的经验，产生偏差和变异性大的问题不可避免。1997年出现了自动ELISPOT读板机，自动判读避免了手工计数中的很多问题，使用自动读板机可以很明显降低计数时的变异性。Currier JR等人[13]在使用自动读板机时通过23个8~11肽组成的肽池(CEF肽池)来确定斑点的参数设置标准，它们可以被CD8+T细胞识别并被MHC-Ⅰ类HLA-A和HLA-B等位基因呈递，形成的斑点代表记忆性CD8+T细胞反应。Janetzki S等人[14]在使用CEF肽池的控制方法时预设读板参数，结果获得了变异性更小的结果。PHA、ConA或PMA/ionomycin应该尽量避免用在参数设置上。

    4.2 分析的验证

    ELISPOT的验证必须在开始临床试验前进行，验证过程应该首先确定分析中可能出现问题的变量(如：孵育时间、试剂纯度、试剂浓度等)，并随后在国际协调会议(ICH)文件ICH-Q2A和ICH-Q2B的指导下对整个操作规程进行验证 ......