原发性肝癌影像学特征与PCNA、AFP的表达(2)
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标本均用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，苏木精-伊红染色。免疫组化采用Elivision TM plus法。PCNA单克隆抗体以及免疫组化Elivision试剂盒为迈新生物技术公司产品。石蜡切片常规脱蜡水化处理，3%H2O2室温孵育15 min，将样品置于柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)中，抗原修复，PBS液冲洗样本。加羊血清，室温孵育，滴加一抗(PCNA单克隆抗体),4℃冰箱过夜。滴加聚合增强物，室温下孵育20 min。PBS液冲洗样本，滴加酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30 min，DAB显色，水洗，苏木精复染30 s，脱水，透明，中性树胶封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。
AFP采用电化学发光免疫双抗体夹心法定量检测。
1.4 结果判断
1.4.1苏木精-伊红染色结果判断肝癌的病理分级采用Edmondson法。Ⅰ级癌细胞呈高分化状态，类似正常肝细胞，细梁状排列；Ⅱ级癌细胞中度分化，形态接近正常肝细胞，但核/质比例增大，核染色深，胞质嗜酸性增加，出现假腺管形结构；Ⅲ级癌细胞分化较差，核体积与核染色变化均超过Ⅱ级，核异形明显，核分裂象多见，可见瘤巨细胞；Ⅳ级癌细胞分化最差，形状极不规则，高度异型的癌细胞占多数，胞质少，核染色浓染，细胞排列松散，梁索状结构不明显。本组中把Ⅰ、Ⅱ级划为高分化，Ⅲ、Ⅳ级划为低分化。
1.4.2 免疫组化结果判断PCNA表达于细胞核内，以胞核中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。计数癌细胞中阳性细胞所占的比例，阳性细胞数≥30%为阳性组，0.05)。
2.2肝癌组织学类型与PCNA、AFP表达的关系
由表2可见，肝细胞癌组和胆管细胞癌组之间PCNA的表达无统计学差异(P>0.05)，而AFP的表达差异有显著性(P5.0 cm组肝癌的PCNA表达及血清AFP含量高于≤5.0 cm组(P0.05)。见图1~6。
与≤5.0 cm组比较，a P=0.005, b P=0.045；与包膜完整组比较，c P=0.009, d P=0.001；与强化均匀组比较，e P=1.000，fP=0.633
3讨论
3.1 肝癌和肝硬化组PCNA、AFP的表达
PCNA是增殖细胞合成DNA所必需的核蛋白，又称周期蛋白，分子量为36 KD，是与细胞增殖周期密切相关的肿瘤性标志物，是衡量肿瘤增殖能力和恶性程度的重要指标之一 ......
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