全反式维甲酸在慢性肾衰大鼠体内的变化及其意义(2)
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1.2.2动物分组及给药手术后7 d，将术后恢复良好的大鼠随机分为两组：① 单纯肾大部切除组(NX)，n=48；② 假手术组(sham)，n=30。
1.2.3标本的留取
1.2.3.1血标本的留取分别于二期手术后7 d开始进入正式试验。先后在正式试验开始时(0周)和开始后第2、4、7、10和13周，NX和sham组分别处死8和5只大鼠。经腹主动脉插管，采集肝素抗凝血2 ml，2 000转/min低温离心(4℃)15 min，留取血浆部分，氮气吹扫后即刻分装，-70℃避光保存，统一检测。
1.2.3.2肾组织标本的留取取血后，经腹主动脉插管注入4℃预冷的PBS缓冲液反复灌洗至肾脏苍白，剪碎，经预冷的1×PBS洗涤2次，加入1 ml裂解液A+B，匀浆，振摇冰浴30 min，应用低温高速离心机，4℃，15 000转/min离心20 min，取上清液即为细胞总蛋白。应用考马斯亮蓝试剂盒检测蛋白浓度后将标本调整至统一浓度，分装管内，氮气吹拂后，保存于-70℃冰箱待测。所用容器均以锡箔纸避光。
1.2.4检测指标及方法
1.2.4.1生化检测采用自动生化分析仪检测各组血清肌酐水平。
1.2.4.2反相高效液相色谱法检测血浆、肾组织atRA浓度分别吸取大鼠血浆和肾组织蛋白提取液50 μl，置于1.5 ml的Eppendorf管内，依次加入40 μl atRA提取液和15 μl饱和磷酸氢二钾溶液，于漩涡混合器上剧烈震荡3 min后，4℃下5 000×g离心5 min。吸出全部上清液置于200 μl离心管内，作HPLC分析。所有处理的样品在4 h内测定完毕。应用色谱峰的保留时间鉴别atRA。定量分析以色谱峰高为准。所有色谱数据由Agilent提供的软件“化学工作站”(Version A. 09.01)自动进行定量计算。
1.3统计方法
SPSS11.5统计软件，采用单因素方差分析。数值以均数±标准差表示，P
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