叶绿素显示液对小鼠直肠淋巴结染色的实验研究(2)
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1 材料与方法
1.1 动物分组及处理
雄性昆明种小鼠24只(24~25周)，体重(49.5±2.8) g，由潍坊医学院实验动物中心提供。按窝别配成12对，随机进入空白对照组(LD1组)和淋巴结染色组(LD2组)。LD2组于直肠上段壶腹部刺入肠壁内，缓慢注入0.02 ml CDS(15 s左右注射完)，见肠壁鼓起一个深绿色的小包为注射成功，同一水平选取2个注射点，观察染色情况，10 min后打开盆腔寻找并清点直肠壁着色淋巴结及肠外三级淋巴结；整个过程在20 min内完成。1、2、4、24 h各脱臼处死3只小鼠，解剖观察记录淋巴结染色情况，取着色的髂动脉间淋巴结，以0.01 mol/L PBS冲洗，分别固定于10%缓冲中性福尔马林液和2%戊二醛固定液，以制备石蜡切片和电镜切片。LD1组小鼠寻找直肠壶腹部淋巴结及直肠外的三站淋巴结,计数，摘取淋巴结，以0.01 mol/L PBS冲洗，固定，石蜡切片和电镜切片。
1.2石蜡切片、超薄切片制备
常规石蜡包埋，制厚4 μm切片，每隔40 μm取一片切片，苏木素-伊红染色，光镜下观察淋巴结。显色淋巴结经固定、脱水后用1∶9 Epon810环氧树脂包埋成块，钻石刀超薄切片，电子染色，H-7500型透射电子显微镜观察并拍片。
2 结果
2.1淋巴结的显色时间
经小鼠直肠壁内注射CDS后，注射点附近淋巴管及肠壁淋巴结立即显色(5 min内)，并迅速向远处蔓延，其余各站淋巴结均在短时间内(
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