高效液相色谱-荧光法测定丙泊酚的血浆浓度(2)
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2.2 血浆样品处理
取血浆20 μl，加入400 μl甲醇，涡旋1 min，高速离心5 min(10 000 r/min)，取上清液20 μl进样分析。
3方法学验证
3.1 方法的专属性
取空白血浆200 μl，按“血浆样品处理”项下操作，进样20 μl，得空白血浆色谱图；取丙泊酚标准液，进样20 μl，得标准品色谱图，丙泊酚保留时间为10.1 min；取空白血浆200 μl，加入一定浓度的丙泊酚对照溶液，按“血浆样品处理”项下操作，进样20 μl，得空白血浆加对照色谱图；取待测血浆样品，按“血浆样品处理”项下操作，得样品色谱图。结果显示，血浆中的内源性物质不干扰丙泊酚的测定。色谱图如图1。
(D)待测血浆样品
图1 丙泊酚HPLC方法专属性色谱图
3.2 标准曲线
取空白血浆200 μl，分别加入适量得丙泊酚标准溶液，配制成一系列浓度为1.0，2.5，5.0，10.0，25.0，50.0 μg/ml的含丙泊酚标准溶液，以上各浓度分别配制5份，各加入380 μl甲醇，涡旋1 min，高速离心5 min(10 000 r/min)，取上清液20 μl进样分析，记录色谱图，以丙泊酚浓度为横坐标，丙泊酚面积为纵坐标，绘制标准曲线。
3.3 方法学考察
日内变异：取空白血浆200 μl，按“标准曲线”项下方法配制并处理低、中、高3个浓度(0.25、1.0、4.0 μg/ml)的丙泊酚血浆样品，每个浓度1 d内测定3次，计算均值及标准差。
相对回收率：取空白血浆200 μl，按“标准曲线”项下方法配制并处理低、中、高3个浓度(0.25、1.0、4.0 μg/ml)的丙泊酚血浆样品，每个浓度测定3次，计算均值及标准差。
绝对回收率：取空白血浆200 μl，按“标准曲线”项下方法配制并处理低、中、高3个浓度(0.25、1.0、4.0 μg/ml)的丙泊酚血浆样品，每个浓度测定3次，同时取相应浓度标准溶液，同体积进样分析，根据两者面积比值计算绝对回收率，计算均值及标准差。
3.4 稳定性试验
室温放置：取空白血浆200 μl，按“标准曲线”项下方法配制并处理、低、中高3个浓度(0.25、1.0、4.0 μg/ml)的丙泊酚血浆样品，室温放置24 h后，再次进样分析，观察室温条件下稳定性变化。
冻融：取空白血浆200 μl，按“标准曲线”项下方法配制并处理低、中、高3个浓度(0 ......
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