乙型肝炎病毒感染临床结局与HLA-DR基因的相关性研究(2)

http://www.100md.com 2008年11月15日 柳富会　李建忠　李长缨　王义成

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    参见附件(263KB，2页)。

     1.2 DNA提取

    采用成品试剂盒(美国戴诺生物有限公司)，实验步骤按说明书操作。红细胞DNA含量：80～100 ng/μl；纯度(A260 nm/A280 nm)：1.65～1.80(DNA定量仪测定)。

    1.3 HLA-DR等位基因分型

    试剂购自美国戴诺生物有限公司和Onelambda公司，引物覆盖2002年以前确定的HLA-DR等位基因，PCR-SSP操作方法按说明书进行。分型等级：低分辨率。

    1.4判读标准

    遵循WHO的HLA系统命名委员会规定，按标准HLA命名系统中星号后的头2个数字，个别等位基因按HLA命名系统中星号后的头4个数字，将等位基因型转化为相应的表现型。DR位点表现型14个：DR1，DR4，DR7，DR8，DR9，DR10，DR11，DR12，DR13，DR14，DR15，DR16，DR17和DR18。

    1.5统计学方法

    基因型频率采用直接计算法，各组间基因型频率比较采用统计软件SSPS 11.5，进行Pearson χ2检验，对有统计意义的基因型再进行组间Pearson χ2检验或连续校正χ2检验(χc2)。

    2结果

    各组HLA-DR基因型频率分布情况见表1。

    *：各组间基因频率比较有显著性差异

    a：HLA-DR1在AHB组与CHB组比较，χc2=0.339，Pc=0.560，差异无统计学意义；LC组与HCC组比较，χc2=0.023，Pc=0.879，差异无统计学意义；LC和HCC合并后与AHB组比较，χ2=8.495，P=0.004，差异有高度统计学意义；LC和HCC组与CHB组比较，χ2=5.667，P=0.017，差异有统计学意义

    b：HLA-DR8在CHB、LC和HCC组间比较，χ2=0.945，P=0.034，差异无统计学意义，所以进行合并与AHB组比较，χ2=8.830，P=0.003，差异有高度统计学意义

    c：HLA-DR13在LC与HCC组比较，χc2=0.081，Pc=0.776，差异无统计学意义，进行合并后与AHB组比较，χ2=6.413，P=0.011，差异有统计学意义；LC、HCC组与CHB组比较，χc2=6.479，Pc=0.011，差异有统计学意义；AHB组与CHB组比较，χ2=26.876，P=0.000，差异有高度统计学意义

    3讨论

    不同的个体在感染HBV后，由于机体的免疫应答状态不同，所以可发生急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙肝后肝硬化及肝细胞癌等多种不同的临床结局。在人类的免疫遗传因素中，HLA基因，即主要组织相容性复合物(major histocomp-atibility complex，MHC)起主导的作用，而HLA-DR基因是其中最为复杂的基因。蒋业贵等[2]报道，HLA-DR抗原不仅与慢性肝炎的炎症程度相关，而且与癌组织分化程度有关。这说明HLA-DR基因的差异可能在HBV感染的结局中起重要作用。Thursz等[3]用RFLP法研究发现，DRB1*1302是不发生持续HBV感染的保护因素，我国的文献报道也表明，HLA-DRB1*13等位基因是汉族人群慢性乙型肝炎的保护性基因[4]。

    目前的文献主要是对HLA基因与HBV感染易感性的研究，本文进一步探讨了HLA-DR与HBV感染相关的肝硬化和肝细胞癌发生的关系。结果发现，HLA-DR1基因型在AHB组频率低于肝硬化和肝癌组，这提示其存在可能不利于HBV的清除，在CHB组比较也低于肝硬化和肝癌组，这提示其尚有可能进一步是肝硬化和肝癌的易感因素。HLA-DR8基因型在HBV慢性感染的三组间无显著性差异，此三组合并后与AHB组比较发生频率明显较高(P=0.003)，这提示HLA-DR8基因型是HBV感染慢性化的促进因素。HLA-DR13基因频率在AHB组高于CHB组，而LC、HCC组也较CHB组明显升高(Pc=0.011)，这提示HLA-DR13基因型可促进HBV的清除，保护机体不形成HBV慢性感染，但是在HBV慢性感染的个体却有可能引起病情向肝硬化或肝细胞癌的结局发展，有研究发现，HLA-DR13阳性人群中HBcAg特异的T细胞系对HBcAg肽具有优势识别能力[5]，这可能是有利于机体清除HBV的机制，但是否可能引起HBV慢性感染者肝内免疫损害的持续发展，从而增加肝硬化或肝癌等不良结局的发生尚需进一步研究。

    本文研究结果表明，不仅HBV感染后病毒的清除与HLA-DR基因有关，而且HBV感染相关的肝硬化和肝癌等不良结局的发生也与HLA-DR基因型有关。这为进一步研究HBV感染的预防和早期对肝硬化和肝细胞癌的高危人群进行有目的的防治提供了进一步的依据。

    [参考文献] ......

    http://www.100md.com/html/paper/1673-0089/2008/32/17-1.htm

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