白芍微粉细胞破壁率的测定(1)
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[摘要] 目的：建立白芍微粉细胞破壁率的检测方法。方法：采用细胞计数法，以薄壁细胞为评价指标，考察超细粉碎技术对白芍细胞破壁率的影响，测定白芍微粉的细胞破壁率。结果：白芍细粉称样量与完整细胞计数的回归分析结果表明，两者呈显著相关性。白芍经超细粉碎后细胞破壁率为97.01%。结论：白芍粉末细胞计数方法简便，稳定，可靠。
[关键词] 细胞破壁率；细胞计数法；微粉；薄壁细胞；显微分析；白芍
[中图分类号] R28[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2009)03(c)-013-03
Determination of wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder
LI Ya, CAI Guangxian, YANG Yonghua, YANG Ying, WEN Junda
(Research Center of Ultra-micro Engineering， Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha410000, China)
[Abstract] Objective: To establish a method to determine wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder. Methods: Cytometry was used to investigate the influence of ultra-pulverization on Raidix Paeoniae Alba, and wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder was also determined. Results: The regression analysis result of the weight of Raidix Paeoniae Alba powder and the number of complete cell indicated that both correlated significantly. Wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder was 97.01%. Conclusion: Cell counting method on the powder of Raidix Paeoniae Alba is convenient, stable and reliable.
[Key words] Wall-broken Rate; Cell counting method; Micropowder; Parenchyma cell; Microscopy; Raidix Paeoniae Alba
白芍为毛莨科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的干燥根，主产于湖南、四川等地，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效[1]，其主要有效成分为芍药苷[2]。白芍超微饮片系我院研制开发的一种微米级新型饮片，主要通过机械粉碎使细胞壁破裂，促使有效成分快速释放[3]。细胞壁的破裂程度直接影响超微饮片中有效成分的溶出，关系到临床药效的强弱，因此，细胞破壁率常被认为是评价中药粉末质量的重要指标之一，但目前仅见关于花粉与孢子类中药破壁率测定的研究报道。不同中药细胞的破壁率测定是中药超细粉碎技术的关键所在，本文拟针对白芍的显微特征，选择评价指标，对细胞破壁率的测定进行探索。
不同中药具有不同的显微特征，每一种显微特征具有固定的常数，根据这一原理，本课题借鉴显微定量法[4]，采用目视法，以白芍细粉为参照物，通过对白芍粉末的完整细胞计数，进行细胞破壁率的测定，考察超细粉碎工艺对白芍药材细胞破壁率的影响。
白芍的显微特征包括薄壁细胞、草酸钙簇晶、草酸钙方晶、导管、淀粉粒、木纤维及管胞[5]。其中薄壁细胞呈类方形、椭圆形或类长方形，壁稍厚，或呈连珠状，显微镜下易于观察，适合于作为检测指标进行破壁率的测定。
1 材料、仪器及样品制备
1.1 材料
白芍药材购自湖南省药材公司，经鉴定符合《中国药典》2005年版一部有关规定。
1.2 仪器
FFl-15型柴日式粉碎机(湖南雪峰机械厂)，BFM-T6BI型振动研磨混炼机(济南贝利公司)，微量吸管，WINNER99显微颗粒图像分析仪(包括三目显微镜、CCD图像采集系统、计算机图像处理软件)。甘油、水合氯醛均为分析纯。
1.3 样品的制备
细粉制备：取白芍药材干燥至水分约为6%，粉碎成细粉(过100目)，备用。
微粉制备：称取白芍细粉加入料斗中，进行超细粉碎，收集微粉(过300目)，备用。
2 方法与结果
2.1 白芍细粉细胞计数及其标准曲线绘制[6-7]
精密称取0.089 6、0.100 5、0.121 5、0.126 6、0.151 2 g细粉，分别置于25 ml容量瓶中，加稀甘油适量，超声处理5 min，使粉末分散均匀，定容至刻度。精密吸取药液30 μl，装片(装片时，使混悬液布满整个盖玻片，以不溢出，无气泡为度) ......
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