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     1 材料与方法

    1.1 血浆和主要试剂

    肝硬化患者血浆来自华中科技大学同济医学院附属同济医院普通外科住院患者。患者4例，均为乙型肝炎患者，肝功能为Child B 级。诊断以生化和CT检查为依据，并由手术探查确定。采血方法：清晨禁饮食，静脉取血2 ml，放于含0.5 ml 0.38%枸橼酸的真空试管中。4℃，3 000 r/min 离心10 min，血浆放入-70℃冰箱保存待用。

    1.2 细胞和抗体

    人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自武汉大学中国典型培养物保存中心。细胞培养基M199及非必需氨基酸购自GIBCO公司。胎牛血清购自Hyclone公司，Geldanamycin构自Qbiogene，Inc., USA；青霉素、链霉素购自华北制药股份公司。兔抗eNOS多克隆抗体、兔抗Hsp90多克隆抗体购自美国DAKO公司。

    1.3 HUVEC的培养

    细胞培养基为含10%胎牛血清及100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素的M199，细胞在实验前常规培养及传代。

    1.4 免疫共沉淀方法检测eNOS与Hsp90的相互作用

    1.4.1 用兔抗-Hsp90检测eNOS与Hsp90复合物。经消化后的HUVEC ......