反相高效液相色谱法测定奋乃静片的含量(2)
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表 2 流动相的醋酸铵浓度对保留时间、峰形和柱效的影响
Tab.2 The effect of concentration of ammonium acetate on retention time, peak shape and column efficiency
2.1.2 色谱条件色谱柱为Diamonsil TM C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相为0.09 mol/L醋酸铵(用醋酸调至pH 3.0)-甲醇(30∶70)，流速为1.0 ml/min，检测波长为256 nm，柱温为40℃。
2.2 系统适用性试验
精密称取对照品适量，加甲醇制成浓度为0.1 mg/ml的溶液，在上述色谱条件下进样20 μl，记录色谱图(图2)，理论板数大于2 000。
2.3 专属性试验
2.3.1 酸破坏溶液取奋乃静对照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，加1 mol/L盐酸1 ml，放置30 min，加1 mol/L氢氧化钠溶液1 ml，用甲醇定容至10 ml。
2.3.2 碱破坏溶液取奋乃静对照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，加1 mol/L氢氧化钠1 ml，放置30 min，加1 mol/L盐酸溶液1 ml，用甲醇定容至10 ml。
2.3.3 氧化破坏溶液取奋乃静对照品1 mg，加甲醇1 ml使溶解，加1%过氧化氢溶液1 ml，放置30 min，用甲醇定容至10 ml。
2.3.4 高热破坏溶液取奋乃静对照品1 mg，加甲醇定容至10 ml，于90℃加热放置2.5 h。
2.3.5 光照破坏溶液①取奋乃静对照品1 mg，于紫外光下照射8 h，加流动相定容至10 ml。②取奋乃静对照品1 mg，加流动相定容至10 ml，于紫外光下照射2.5 h。
取上述溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样20 μl，记录色谱图，以考察奋乃静峰与杂质峰的分离情况。结果表明，各破坏条件下的降解产物峰对奋乃静峰无干扰，分离效果良好，说明该方法专属性良好(图3)。从图中也可以看出，奋乃静对酸、碱和热均较稳定，无杂质峰出现；氧化破坏后，有杂质峰出现，说明奋乃静对氧化剂不稳定，应避免其氧化；固体奋乃静经光照破坏8 h后，无杂质峰产生，而奋乃静溶液经光照破坏后，出现明显的杂质峰，说明奋乃静溶液对光极不稳定，应避光保存。
2.4 线性关系考察
避光操作(以下实验均避光操作)。精密称取奋乃静对照品约100 mg于100 ml容量瓶中，加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1、5、1、5、5 ml于100、100、10、25、10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/ml的奋乃静对照品溶液，分别进样20 μl，记录色谱图，以浓度C(mg/ml)对峰面积A进行线性回归，得线性方程为A=98 953 254C+259 369，r=0.999 9。结果表明，奋乃静的浓度在0.01～0.50 mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。
2.5 精密度试验
取同一份对照品溶液连续进样6次，峰面积RSD为0.2%。
2.6 重复性试验
取同一批号供试品溶液6份，按“2.10”项下操作，平均含量为96.2%，RSD为0.9%。
2.7 回收率试验
精密称取奋乃静对照品约100 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品50片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于奋乃静5 mg)，置100 ml量瓶中，共9份。分别精密量取对照品溶液3、5、7 ml各3份于供试品量瓶中，各加入甲醇60 ml使溶解，并稀释至刻度，按“2.10”项下条件测定，测得平均回收率为99.0 %，RSD为1.8%(n=9)。
2.8 稳定性试验
取同一份样品溶液，分别于0、1、2、3、4、5、6、8 h取20 μl进样，记录色谱图，奋乃静的峰面积基本不变，RSD为0.7%。结果表明，奋乃静注射液在8 h内稳定性良好。
2.9 检测限和定量限
以信噪比为3∶1，测得系统的最低检测浓度为0.2 μg/ml，即最低检测限为4 ng；以信噪比为10∶1，测得系统的最低定量浓度为0.6 μg/ml，即最低定量限为12 ng。
2.10 样品含量测定
精密称取奋乃静对照品约10 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于奋乃静5 mg)，置50 ml量瓶中，加甲醇60 ml使溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。取上述两种溶液各20 μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，结果厂家为苏州天力士帝盟药业有限公司、江苏黄河药业股份有限公司、广东彼迪制药有限公司的供试品含量测定结果分别为94.9%、97.5%、96.0%。
3 讨论
奋乃静在水中几乎不溶，因此配制对照品和供试品溶液时，选用甲醇使溶解并定容。本文建立的色谱系统具有流动相组成简单，对色谱柱损伤小的优点，用于奋乃静的含量测定，快速、准确、专属性强。
[参考文献]
[1]汪洋,陈太友 ......
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