HPLC法测定湿热痹颗粒(减糖型)中盐酸小檗碱的含量
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[摘要] 目的:建立高效液相法测定湿热痹颗粒(减糖型)中盐酸小檗碱含量的方法。方法:采用Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-1%磷酸溶液(48∶52)(每100 ml中加入十二烷基磺酸钠0.1 g);检测波长:265 nm;流速:1.0 ml/min。结果:盐酸小檗碱在0.010 28～0.411 20 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为98.30%,RSD=0.44%。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于湿热痹颗粒中盐酸小檗碱的质量控制。
[关键词] 湿热痹颗粒;盐酸小檗碱;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2[文献标识码] B[文章编号] 1673-7210(2010)05(b)-044-02
Content determination of Berberine Hydrochloride in Shirebi Granules by HPLC
LUO Jing1, TENG Huaifeng2, SHI Fa2
(1.Institute for Drug Control of Fushun City, Fushun 113006, China; 2. Institute for food and drug Control of Liaoning Province, Shenyang 110023, China)
[Abstract] Objective: To establish a method for the content determination of berberine hydrochloride in Shirebi Granules by HPLC. Methods: The Diamonsil-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of acetonitrile and 1%-phosphoric acid (48∶52) (to each of 100 ml add 0.1 g of sodium dodecylsulfonate), the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was at 265 nm. Results: The linear ranges of berberine hydrochloride was at 0.010 28-0.411 20 μg (r=0.999 8), the average recovery was 98.30% with a RSD of 0.44%. Conclusion: The method is fast, reliable, accurate and can be used in the quality control of berberine hydrochloride in Shirebi Granules.
[Key words] HPLC; Berberine hydrochloride; Shirebi Granules; Content determination
湿热痹颗粒为辽宁好护士集团本溪制药有限公司生产的独家品种,收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第16册,具有祛风除湿、清热消肿、通络定痛的功效,用于湿热痹证。原标准中质量控制项只有性状、鉴别和检查项,没有含量测定。本实验建立了对处方中黄柏的盐酸小檗碱含量测定方法,有效地控制了药品质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日本岛津LC-2010C HT高效液相色谱仪;日本岛津LC Solution色谱工作站。
1.2试药
盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110713-200609);水为二次蒸馏水,其余试剂均为分析纯;湿热痹颗粒由辽宁好护士集团本溪制药有限公司提供。
2 方法与结果
2.1溶液的制备
2.1.1 对照品溶液制备 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含10 μg的溶液,即得对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液制备 取装量差异项下本品,研细,取约1.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶内,精密加入盐酸-甲醇(1∶100)溶液50 ml,密塞,称定重量,超声处理(功率:250 W,频率:50 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用盐酸-甲醇(1∶100)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得供试品溶液。
2.1.3 阴性对照液溶液制备 取除黄柏外的其他药材,按所确定的工艺生产阴性样品。其他操作同“2.1.2”项下方法,制成阴性对照液。
2.2 色谱条件
色谱柱:Diamonsil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);检测波长:265 nm;流速:1.0 ml/min;流动相:乙腈-1%磷酸溶液(48∶52)(每100毫升中加入十二烷基磺酸钠0.1 g);理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于5 000;按上述色谱条件,取供试液、对照液及阴性液各10 μl,注入高效液相色谱仪,记录色谱图(图1)。结果表明,供试品色谱与对照品色谱具有相同保留时间的色谱峰,阴性样品在此峰位无吸收,无干扰,盐酸小檗碱峰与其他组分峰分离完全。
2.3 线性关系考察
精密称取盐酸小檗碱对照品10.28 mg,置50 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取该溶液5 ml,置100 ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。浓度分别为①C1=0.010 28 mg/ml,②C2=0.205 60 mg/ml。分别精密吸取溶液①1、2、5、10 μl和溶液②1、2 μl,分别注入液相色谱仪,测定色谱峰面积。以对照品峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。结果表明,盐酸小檗碱对照品进样量在0.010 28～0.411 2 μg范围内呈良好的线性关系。标准曲线方程:Y=4 468 143X-8 904(r=0.999 8)。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μl,连续进样5次,测定色谱峰面积,RSD为0.6%,表明本法精密度良好。
2.5 重复性试验
取样品(批号:20060101)6份,按“2.1.2”项下方法制备样品,并按上述方法测定色谱峰面积,计算得样品中盐酸小檗碱的平均含量为2.35 mg/袋,RSD为1.1%。表明该方法重复性良好。
2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液在放置0、1、2、3、4、5 h后分别进样10 μl,测定色谱峰面积,RSD为0.8%,结果表明供试品溶液在5 h内基本稳定 ......
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