浊度法测定硫酸小诺霉素的效价(1)
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[摘要] 目的:建立浊度法测定硫酸小诺霉素效价的方法。方法:采用浊度法测定硫酸小诺霉素的效价,并将浊度法与管碟法测定结果相比较。结果:浊度法与管碟法测定结果一致,浊度法测定结果可信限率较低。结论:本法简便、快捷,可用于硫酸小诺霉素的效价测定。
[关键词] 浊度法;硫酸小诺霉素;效价;管碟法
[中图分类号] R927.2[文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2010)06(a)-057-02
Determination of Micronomicin Sulfate by turbidimetric method
YAN Chaoli
(Nanyang Institute for Drug Contral, Nanyang 473000, China)
[Abstract] Objective: To establish a turbidimetric method to determine Micronomicin Sulfate. Methods: The turbidimetric method was used to determine Micronomicin Sulfate, comparedwith diffusion method. Results: The contents of Micronomicin Sulfate was the same between turbidimetric method and diffusion method. The confidence limit of the turbidimetric method was lower compared with the diffusion method. Conclusion: The turbidimetric method is simple, rapid, and can be used for determining the content of Micronomicin Sulfate.
[Key words] Turbidimetric method; Micronomicin Sulfate; Potency; Diffusion method
硫酸小诺霉素为广谱氨基糖苷类抗生素,耳毒性和肾毒性较低,对6-N-乙酰酯酶抗药性菌有效,有强大和快速的抗菌能力,在治疗由革兰阴性菌如铜绿假细胞菌、大肠埃希菌等引起的感染时,与内酰胺类抗生素有协同作用。目前该药物及其制剂采用管碟法作为含量测定的方法,但管碟法为传统方法,虽能直观反映其体外抗菌能力,但是管碟法进行过程中影响因素颇多,而且消耗人力大,花费时间长;浊度法既能弥补这些缺点,又具有测定结果精密度高。本研究建立浊度法测定硫酸小诺霉素效价的方法,即可直观反映药物的抗菌活性,又可在检测当天获得结果,灵敏、快速,可作为硫酸小诺霉素效价的测定方法[1]。
1 仪器与试药
1.1 仪器
抑菌圈测量分析仪ZY-300IV型、微生物比浊法测定仪WBS-100型(北京先驱威锋技术开发公司);BP-211D分析天平(SARTORIUS公司);UV-2401型紫外分光光度计(日本岛津)。
1.2 试药
大肠埃希菌[CMCC(B)44103];硫酸小诺霉素标准品(批号:130342-200703,效价:574 U/mg);培养基Ⅲ(批号:060403,中国药品生物制品检定所);硫酸小诺霉素原料药(山西省侯马市平阳制药厂);氯化钠,磷酸氢二钾,磷酸二氢钾,均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 实验条件
2.1.1 大肠埃希菌悬液的制备取大肠埃希菌[CMCC(B)44103]的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35～37℃培养20～22 h,然后用灭菌水将菌苔洗下,并加灭菌水稀释,使其在580 nm波长处的吸收度为1.0。
2.1.2 试验菌悬液加入量的选择 取大肠埃希菌悬液,加入到培养基中,制成含菌浓度分别为1%、2%、3%、4%、5%的培养基,培养2.5 h,在580 nm处测定吸收度,结果含3%菌液浓度在3%时,吸收度为0.52,符合要求,故选3%的菌液浓度。
2.1.3 抗生素溶液配制精密称取标准品和原料药适量,加灭菌水溶解,配制成1 000 U/mg的溶液,精密量取此溶液适量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.0)稀释至最终浓度为10 U/mg和20 U/mg(剂间比为1∶2)。
2.1.4 抗生素溶液的分装 取已灭菌的石英比色管16支,分别为ds14支、ds24支、dT14支、dT24支,分别标记,精密量取标准溶液ds1、ds2及dT1、dT2各1.0 ml,按编号加入相应比色管中。
2.1.5 含菌培养基的分装在培养基中加入一定量试验菌(3%),用已灭菌的刻度吸管分装至比色管中,每管分装9.0 ml,立即振摇,混合均匀。
2.1.6 培养、测量与计算使用WBS-100微生物比浊仪,恒温培养,定时振荡,在线测量,计算结果[2]。
2.2 线性范围考察
称取标准品适量,加灭菌水制成1 000 U/mg的溶液,分别精密吸取此液适量,用灭菌磷酸盐缓冲液(pH=7.0)稀释成8、10、12、16、20、24、30、35、40 U/mg的溶液 ......
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