人胎盘组织液抗腹膜粘连作用及其作用机制研究(2)
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1.2 实验动物及饲养条件
SD大鼠60只,7~8周龄,雌雄各半,体重240～280 g,来源:河北省实验动物中心。饲养条件:中央空调调控温度和湿度,大鼠饲养笼内饲养,每笼5只,温度19～26℃,相对湿度40%～70%,控制光照明12 h,暗12 h,动物自由摄食及饮水。
1.3 实验方法
1.3.1 制备大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型[4]大鼠禁食12 h,手术当天禁水,腹腔注射10%水合氯醛,300 mg/kg麻醉。仰卧位固定麻醉大鼠,碘伏消毒下腹部皮肤,下腹部正中纵向切口4 cm,逐层进腹,找到蚓突后提出切口外,用手术刀片轻刮距盲端3.0 cm以内的蚓突前侧浆膜60次,使整个浆膜面充血并出现均匀的点状出血,刮伤盲肠面积约2 cm×1 cm,回纳盲肠,锐性切除与损伤的盲肠相对的壁层腹膜和大部分肌层,造成2 cm×1 cm的腹壁缺损,将刮伤的盲肠与腹壁缺损处相对放置,使其相互接触,用1号丝线间断缝合两层关腹。
1.3.2 分组及给药实验分为三组:假手术组、模型组、人胎盘组织液组。模型组:只制备腹膜缺损/盲肠刮伤模型,不用药;假手术组:除不损伤盲肠和腹壁外,其他手术操作同模型组;人胎盘组织液组:将人胎盘组织液稀释100倍,术后每日肌内注射,用量1 ml/100 g体重。
1.3.3 Belluco C及Nari五级分类评分术后7 d和14 d,腹腔注射10%水合氯醛300 mg/kg麻醉,倒U形切口掀起腹壁,观察腹膜粘连情况,由一人采用盲法按Belluco C及Nari五级分类评分。评分标准见表1。
1.3.4 制备病理组织切片受损肠壁和粘连组织经10%中性福尔马林固定后,各级浓度的酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋。切片厚度为6 μm,进行常规HE染色、Masson染色。
1.3.5 HE染色石蜡切片经二甲苯脱蜡,无水乙醇洗去二甲苯,梯度酒精和蒸馏水水化组织切片,苏木精染色1～2 min,自来水洗1 min,1%盐酸酒精分化,自来水洗1 min;1%氨水返蓝数秒、蒸溜水洗1 min,入伊红染液2 min;常规脱水、透明,中性树胶封片 ......
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