黄芪注射液对结肠癌SW480细胞的生长抑制作用(2)
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2.2 MTT法检测黄芪注射液对SW480细胞的抑制作用
与空白对照组比较，125 μg/ml以上浓度的黄芪注射液对SW480细胞生长增殖有明显的抑制作用，且与作用浓度呈正比(P=0.000<0.01)。结果见表1。
2.3 流式细胞仪FCM法分析结果
空白对照组SW480细胞自然凋亡率为0.86%，奥沙利铂20 μg/ml对照组凋亡率为9.41%，黄芪注射液作用SW480细胞48 h后，125、250、500、1 000 μg/ml各组的凋亡率分别为24.2%、42.6%、64.1%、84.0%。细胞周期分析提示，加用黄芪48 h后G1期细胞数量增多，S期细胞数量减少，黄芪注射液使SW480细胞的生长停滞在G1期，并且促进G1期细胞凋亡，并在一定范围内呈浓度依赖性。统计分析表明125 μg/ml以上浓度的黄芪注射液组SW480细胞凋亡率较空白对照有明显升高，有显著性差异(P=0.000<0.01)(表2)。
3 讨论
黄芪注射液是常用的一种补气用药制剂，具有补气升阳、益卫固表等功效。黄芪中含有黄芪多糖、黄芪皂苷、黄酮类、多种氨基酸及铁、锰、锌、硒等多种微量元素。这些成分具有不同的生物学活性，如清除氧自由基，增加巨噬细胞吞噬病毒的抗病毒能力，具有多方面的免疫调节和免疫增强作用，具有双向调节免疫功能，是一种免疫调节剂[1-3]，提高机体抗病能力。目前大多数研究人员认为黄芪抗癌作用并非药物直接杀灭癌细胞，而是通过对机体的免疫调节，诱导淋巴细胞产生IL-2和IFN，直接或间接参与细胞因子和免疫系统的调控，从而达到诱导癌细胞凋亡。据报道[4-9]黄芪注射液可以用于大肠癌患者手术化疗后免疫功能低下的治疗，增强化疗药物疗效，减少细胞毒性药物的损伤，保护骨髓维护造血功能，提高患者生存质量，延长生存期，取得较佳治疗效果。
大肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，发病率居肺癌、乳腺癌之后而占第三位。近年各地资料显示其发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着人们的健康与生命[10]。目前常用的化疗药物存在选择性低，毒性大，价格贵，易产生耐药性等缺陷。因此寻找靶向性强，毒性低，价格优惠，分子量小，易穿透肿瘤组织的新型药物是抗肿瘤新药开发研究的发展方向。大多数化疗药物都通过诱导肿瘤细胞凋亡，因此其可能是不同机制抗癌药物发挥作用的共同通路[11]。刘成军等[12]报道黄芪注射液能抑制人类小涎腺腺样囊性癌细胞株增殖并诱导细胞凋亡。李琼等[13]发现黄芪注射液对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435的体外增殖具有抑制作用。Tin等[14]研究表明黄芪可以作为结肠癌有效的化疗制剂或配合传统化疗治疗结肠癌，目前机制不明。因此我们尝试应用黄芪注射液行体外实验，探讨其是否诱导人结肠癌SW480细胞凋亡，寻找其作用机制。
本实验以不同浓度的黄芪注射液不同时间直接作用于人结肠癌SW480细胞株，普通光镜下观察细胞形态学变化，结果显示癌细胞数量减少，细胞体积缩小，变圆，折光性差，细胞脱落漂浮，胞浆浓缩，核染色质固缩，细胞核碎裂。通过MTT法检测发现，黄芪注射液对SW480细胞生长增殖有明显的抑制作用，且与作用浓度呈正比。本实验还通过FCM法检测黄芪注射液对SW480细胞生长周期的影响，结果表明对照组SW480细胞自然凋亡率为0.86%，黄芪注射液作用SW480细胞48 h后，125、250、500、1 000 μg/ml各组的凋亡率分别为24.2%、42.6%、64.1%、84.0%。细胞周期分析显示实验组黄芪注射液对人结肠癌SW480细胞的体外增殖具有抑制作用，并能促使SW480细胞阻滞于G1期，诱导SW480细胞凋亡。本研究为黄芪注射液用于临床治疗大肠癌患者提供了有力的依据。
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