新生小鼠皮肤成纤维细胞的分离培养与鉴定
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胡素贤 倪晓妍 王嘉逊 高丰光 厦门大学附属第一医院呼吸内科;厦门大学医学院基础医学部免疫学实验室;
【摘要】目的:建立一种简单易行的自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞的方法,并对分离细胞进行鉴定。方法:无菌取新生Balb/c小鼠背部皮肤,剪碎呈1 mm2大小,组织块均匀放置于培养皿并以DMEM(含10%胎牛血清)培养基对组织块进行培养;以胰蛋白酶消化分离细胞-重新贴壁法对分离培养细胞进行纯化;以NIH3T3细胞为对照,免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测波形蛋白表达情况以对培养的成纤维细胞进行鉴定。结果:新生小鼠背部皮肤组织培养3 d时可见细胞呈细长梭形或呈多角形,组织培养5 d后可见大量细胞自组织块游离生长,组织培养7 d后可见细胞呈单层漩涡状排列或纵横交错,贴壁细胞团呈放射状生长。免疫荧光、流式细胞术、Western blot检测发现分离细胞和NIH3T3细胞均表达波形蛋白;流式细胞术证实分离的成纤维细胞波形蛋白表达阳性率和平均荧光密度分别为13.33%和9.89,而NIH3T3细胞波形蛋白阳性率和平均荧光密度分别为28.11%和14.16。结论:分离培养的细胞具有成纤维细胞的形态学特征,并表达成纤维细胞的特征分子波形蛋白。以组织块直接培养法成功自新生小鼠皮肤分离培养成纤维细胞,为建立肿瘤体外模拟微环境提供实验材料和研究基础。
【关键词】 新生小鼠 成纤维细胞 体外培养 波形蛋白
【基金】福建省自然科学基金计划资助项目(编号:2008J0112) 福建省厦门市自然科学基金(编号:3502Z20104002)
【分类号】R730.2
肿瘤发生是一个环境多因素、机体内多系统、外因通过内因交互作用的系统性疾病过程。肿瘤微环境指在肿瘤生长过程中,由肿瘤细胞和内皮细胞、免疫细胞、成纤维细胞等基质细胞构成的肿瘤细胞生长的特殊环境[1]。作为肿瘤基质细胞重要组分的成纤维细胞是一个异质性和组织特异性
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腫瘤发生是一个环境多因素、机体内多系统、外因通过内因交互作用的系统性疾病过程。腫瘤微环境指在腫瘤生长过程中，由腫瘤细胞和内皮细胞、免疫细胞、成纤维细胞等基质细胞构成的腫瘤细胞生长的特殊环境。作为腫瘤基质细胞重要组分的成纤维细胞是一个异质性和组织特异性的细胞群体，被细菌产物、细胞因子等启动后可分泌新的细胞因子、趋化因子，招募白细胞聚集，启动炎症反应而参与腫瘤的发生和迁移过程。但现有研究多以腫瘤细胞为研究重点，关注腫瘤细胞的基因突变、增殖凋亡、信号通路改变等方面，而忽略了腫瘤组织中的基质细胞也对腫瘤的发生、发展发挥着重要作用。这一微环境因涉及多种细胞成分的相互作川及具有血供不足、问质压力高、营养相对缺乏等特点成为研究腫
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