参知健脑胶囊对Beagle犬的急性毒理研究(2)
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本研究旨在观察参知健脑胶囊对Beagle犬的急性毒理反应，为临床前反复给药的毒性研究及临床安全用药提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验药物
参知健脑胶囊由北京中医药大学中药学院提供，批号：20100907。
1.2 实验动物
5～7个月龄普通级Beagle犬6只，雌雄各半，体重：雌性5.85～6.68 kg，雄性6.45～7.47 kg，由北京玛斯生物技术有限公司提供，合格证号：0165269。
1.3 动物饲养与管理
在北京昭衍新药研究中心有限公司普通级动物房饲养，所有动物购入后，由兽医负责检疫，检疫驯养期15 d；饲料由北京科澳协力饲料有限公司生产；动物饮用水为符合国家生活饮用水卫生标准的自来水，用饮水盆供应，外观和细菌指标每月检测一次；不锈钢材料笼具，规格为长×宽×高＝1 250 mm×800 mm×900 mm，单笼饲养；动物房设定的温度范围是18~26℃，实测温度范围是18～23℃，设定的湿度范围是40%~70%，实测湿度范围是29%~66%，光照12 h明暗交替。除实验方案规定的禁食时间外，每只动物每天上午和下午各喂食1次，每次喂食150 g左右，动物自由摄水；笼具每天冲洗1次，动物房地面和墙面每周消毒1次，用0.1%新洁尔灭或0.5%的84消毒液擦拭消毒，两种消毒液交叉使用。
1.4 动物分组
采用区段随机法分组，即按性别将动物分成雌雄两个区段，然后用Excel软件给出每个动物的随机数，之后将随机数从小到大进行排序，将比格犬分为3组，每组雌雄各1只。
1.5 药物配制
根据给药前最近1次的动物体重，计算各组动物的给药量。称取适量供试品，用灭菌注射用水溶解。溶解后的供试品常温条件下保存使用。
1.6 给药剂量及方法
首次给药剂量、给药浓度、给药容量见表1。
表1 第1次灌药剂量
注：人体重按60 kg计算，临床拟用剂量为17.5 mg/kg
由于中、高剂量组动物药后半小时左右呕吐，呕吐物颜色与给予的供试品相似，考虑给药量不能达到实验设计要求。此外，低剂量组动物没有呕吐，考虑动物呕吐可能与药物浓度较高有关。所以，在首次给药2 d后，对中、高剂量组动物进行了第2次给药，并对给药容量和药物浓度进行了相应的调整，具体见表2：
表2 第2次灌药剂量
灌胃给药，低剂量组动物给药1次，中、高剂量组动物给药2次。动物灌胃前禁食过夜，药后再禁食约1 h。灌胃给药时，使用20 ml一次性注射器准确抽取所需溶液，用16号灌胃管经口灌胃给药，每只动物给药完毕后给予约10 ml饮用水冲洗胃管。
1.7 检测指标
1.7.1 临床观察
一般临床观察内容：笼旁观察动物死亡或濒死情况、精神状态、行为活动、进食情况、粪便形状等；详细临床观察内容：精神状态、行为活动、皮肤、被毛、眼、耳、鼻、口腔、腹部、外生殖器、肛门、四肢、足和呼吸等。
1.7.1.1 给药当天 给药后笼旁观察，1 h内连续观察，每隔15 min记录1次，1～4 h内至少每隔1 h观察1次；对未出现明显异常反应的动物，4 h后结束观察；对出现明显异常表现的动物，进行1次详细临床观察，部分动物药后5 h结束观察。给药当天的笼旁观察和详细临床观察均记录在同一张记录表中。
1.7.1.2 其他时间 观察时间：检疫驯养期每天1次一般临床观察；给药后次日开始，每天上午和下午各进行1次一般临床观察，第7天和第14天进行详细临床观察，观察期为14 d。在同一时间段，一般临床观察与详细临床观察不重复实施。
1.7.2 生命体征
1.7.2.1体重 给药前、给药后第7天和第14天称重，每次称重均在上午喂食前进行。
1.7.2.2体温 给药前、药后4～5 h、第7天和第14天测量体温。
1.7.2.3心电图 测定时间：给药前、药后4～5 h、第7天和第14天，心电指标包括心率、P-R间期、Q-T间期和QRS时限。
1.7.3 血液学检查
给药前、给药后第7天和第14天三个时点取血，动物前肢皮下静脉取血；血常规血样用EDTA-2K抗凝，用Bayer Advia 2120全自动血球分析仪测定；血凝血样用枸橼酸钠1∶9抗凝，分离血浆，使用MC-4Plus四通道血凝仪测定，用光学比浊法；血生化血样不抗凝，取血后2 h内分离血清。使用TBA-120FR型全自动生化分析仪和Medica Easylyte型全自动电解质分析仪测定。
1.7.3.1 血常规 包括红细胞计数网织红细胞计数、血红蛋白、红细胞容积、平均红细胞血红蛋白、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白浓度、血小板计数、白细胞计数、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞。
1.7.3.2 血凝 包括凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)。
1.7.3.3 血生化 天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、丙氨酸氨基转换酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸磷酸激酶(CK)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)、总胆红素(TBil)、钾离子浓度(K+)、钠离子浓度(Na+)、氯离子浓度(Cl-)。
1.7.4 眼科检查
给药前以及给药后第14天行眼科检查。检查方法为通过肉眼或检眼镜观察动物的眼睑、结膜、巩膜、角膜、前房、虹膜、瞳孔、晶体、玻璃体和眼底有无明显异常。
1.7.5 病理检查
所有动物实验结束后均进行大体解剖，发现任何组织器官体积、颜色、质地等肉眼可见的病变时，记录并将有异常改变的组织器官取材并固定于10%中性福尔马林溶液中，制片并进行组织病理学检查。
1.8 动物麻醉及安乐死方法
观察期结束(给药后第15天)时，用浓度为30 mg/ml的戊巴比妥钠溶液，按30 mg/kg的剂量静脉注射麻醉动物，直至动物进入无意识状态后，股动脉快速放血，将动物安乐死。
1.9 数据处理方法
将不同组别及同一组动物给药前后的体重、体温、心电图、血液细胞计数、凝血功能和血液生化等指标直接进行比较，综合评价。
2 结果
2.1 不同组别给药后的临床观察
试验期间，没有发现动物死亡或濒死 ......
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