丹红注射液预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞损伤的影响(2)
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参见附件。
1.8 统计学方法
采用SPSS 11.5软件包进行统计分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，多组比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK检验。以P < 0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 光镜下心肌细胞鉴定结果
心肌细胞鉴定光镜下观察，心肌细胞接种72 h可见细胞形态不规则，呈梭形，三角形或多边形，单核，有多个伪足伸出，形成细胞簇；免疫组化染色显示，α-横纹肌肌动蛋白呈阳性反应，阳性率达90%以上。
2.2 流式细胞仪检测结果
结果显示，缺血再灌组细胞凋亡率表达明显高于对照组，差异均有高度统计学意义(P < 0.01)；与I/R组比较，用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性地下调凋亡率(P < 0.05或P < 0.01)。见表1。
表1 丹红注射液对心肌细胞凋亡率的影响(x±s，%)
注：与正常对照组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与I/R组比较，#P < 0.05，##P < 0.01
2.3 Bas、Bcl-2蛋白的表达
结果显示，缺血再灌组细胞Bas表达明显高于对照组，Bcl-2表达则显著低于对照组，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)；而与I/R组相比，用丹红注射液预处理后呈浓度依赖性的下调凋亡率及Bas表达，上调Bcl-2表达(P < 0.05或P < 0.01)。见表2。
3 讨论
缺血心肌的早期再灌注治疗能减轻缺血损伤，使细胞凋亡下降，减小梗死面积，缺血较长时间后再灌注反而会引起再灌注损伤，造成细胞凋亡明显增加，因而心肌细胞凋亡被认为是再灌注损伤的重要环节[2]。丹红注射液目前已用于临床治疗冠心病，且对离体大鼠缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用，此作用可能与抑制心肌脂质过氧化、增强抗氧化能力及调控凋亡基因有关[3]。
Bcl-2、Bas基因家族是目前较为公认与凋亡密切相关的基因，Bcl-2基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡，被称为细胞凋亡抑制基因，Bas单克隆抗体在体内与Bas结合后均能导致表达Bas的细胞发生凋亡，从而证明Bas是一种识别Bas配体，并将凋亡信息传递给细胞的细胞表面受体[4-5]。本实验结果显示，心肌缺血再灌能促进心肌细胞凋亡，且伴随着Bcl-2基因表达蛋白的明显降低和Bas基因表达蛋白的明显升高；而丹红注射液则能呈浓度依赖性地下调心肌细胞的凋亡率，并伴有Bcl-2基因表达蛋白的上调和Bas基因表达蛋白的下调。
大鼠心肌缺血再灌注过程中， Bcl-2蛋白表达减少而Bas蛋白表达增加，表明心肌细胞凋亡可能是一方面Bcl-2蛋白表达降低，抗凋亡能力减弱，而另一方面Bas蛋白表达增加，发挥了促凋亡能力的缘故[6]。丹红注射液则可通过上调Bcl-2蛋白表达的和下调Bas蛋白表达，发挥保护缺血再灌心肌细胞的作用，这也为临床上应用丹红治疗心肌缺血再灌注损伤提供分子调控依据。
[参考文献]
[1] 郄素会，郝哲，刘增娟，等.丹红注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].现代中西医结合杂志，2008，35(17)：5428-5430.
[2] Wang TD，Chen WJ，Su SS，et al. Increased cardiomyocyte apoptosis following ischemia and reperfusion in diet-induced hypercholesterolemia：relation to Bcl-2 and Bax proteins and Caspase-3 activity[J]. Lipids，2002，37(4)：385-394.
[3] 周晓枫.丹红注射液与硝酸甘油联用治疗不稳定心绞痛疗效观察[J].中国医药导报，2007，4(14)：65 ......
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