微小RNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义(2)
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参见附件。
1.9 统计学方法
所得数据使用SPSS 13.0统计软件包进行Student检验，结果以均数±标准差(x±s)表示，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 MicroRNA的实时荧光定量PCR
以管家基因U6 RNA做内参，用△△Ct法对Real-time PCR结果分析。其中，△△Ct=Ct miRNA-Ct U6，每个MicroRNA相对表达量为2-(△△Ct)。直肠癌组织与癌旁正常组织中表达量比值低于0.66的MicroRNA有41种。见表1。
2.2 Northern印迹杂交
根据Real-time PCR结果，随即选取miRNA-152进行Northern blot。miRNA-152表达量降低(图1)，与其Real-time PCR结果吻合，可旁证实时荧光定量PCR结果准确可信。
2.3 PAM分析
根据60例直肠癌标本筛选出的具有与癌旁正常结肠组织显著表达差异的MicroRNA，对另外20例组内随即编号的直肠癌组织与其正常直肠组织进行定性判断，即组内样品中MicroRNA表达量显著降低的标本即可判定为直肠癌组织。其结果与病理检验完全一致，吻合率为100%。
3 讨论
直肠癌是发达国家常见的恶性肿瘤之一[5]，近年来我国经济发展，人民生活水平不断提高，伴随而来的却是直肠癌发病率年增长速度的居高不下，年增率已接近4%，2倍于世界平均水平。直肠肿瘤通常是由直肠黏膜病变，而逐渐演变为腺瘤状息肉，最后形成恶性肿瘤，瘤的形成较慢。如果在发病初期进行干预治疗，直肠癌患者可达90%的存活率，但是，早期直肠癌患者并无显著症状，有40%以上的患者属于中晚期，预后较差，存活率大大降低。因此，直肠癌发生分子机制的研究对于早期诊断治疗具有重大的临床应用价值。
最近对MicroRNA的研究已经成为肿瘤学研究的热点。研究表明，肿瘤发生或个体的肿瘤易感性都与MicroRNA扩增和变异有相关性。很多MicroRNA的调控靶位点与抑癌基因偶联，若这类MicroRNA功能紊乱则可导致下游基因表达的改变，进而可能会引发肿瘤的形成。据研究，有占50%以上的MicroRNA位于癌相关基因序列中，其随着癌基因的表达而发生明显变化[6-7]。因此，研究关键MicroRNA在肿瘤发生过程中的网络调控机制和鉴定，可以作为肿瘤研究新的标记分子，开创肿瘤分子诊断学和癌症临床治疗学的进新时代。
本实验对60例直肠癌标本的MicroRNA进行实时荧光定量PCR检测，发现其中有41种MicroRNA的表达量显著下降，并用Northern印迹杂交进行验证，结果一致。经PAM分析MicroRNA作为直肠癌检验依据结果可靠，方法可行。MicroRNA作为新的直肠癌标志物，具有灵敏度高、检验成本低等优点，可用于直肠癌早期筛查和普查。同时，由于能作为检验的MicroRNA种类多，所以能够避免个体差异而产生的检验错误。
综上，作为直肠癌的早期诊断和细胞靶向治疗，对MicroRNA检测都有临床价值。但是MicroRNA在肿瘤中的作用机制还未完全明确，在临床应用方面还未深入进行[8-9]。相信随着生物医学技术的不段进步，在直肠癌的早期有效诊治方面MicroRNA将发挥极其重要的作用。
[参考文献]
[1] Guamieri DJ，DiLeone Pd. MicmRNAs：a new class of gene regulators [J]. Ann Med，2008，40(3)：197-208.
[2] Cheng HY，Obrietan K. Revealing a role of microRNAs in the regulation of the biological clock [J]. Cell Cycle，2007，6(24)：3034-3035.
[3] Chen CF，Ridzon DA，Broomer AJ，et al. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR [J]. Nucleic Acids Res，2005 ......
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